儀器：Thermo ScientificTM UltiMateTM 3000 超高效液相色譜儀

色譜柱：Hypersil Gold C18 (100×2.1 mm, 1.9 µm)

流動相：A 為水相：0.1% 甲酸水；B為有機(jī)相：乙腈

 

儀器：Thermo ScientificTM Q Exactive Focus 四極桿靜電場軌道阱 高分辨串聯(lián)質(zhì)譜。HESI 離子源參數(shù)：Spray Voltage +3.5 KV、2.8 KV，快速正負(fù)切換；Sheath Gas Pressure: 40arb；Aux Gas Pressure: 10arb；Capillary Temp: 300℃；Heater Temp: 350℃

 

質(zhì)譜掃描參數(shù)：全掃描范圍 150–800 m/z，分辨率 70,000 FWHM；二級：Discovery 數(shù)據(jù)依賴自動觸發(fā)；母離子隔離窗 口 0.4 amu、4.0 amu；分辨率 17,500、70,000 FWHM。

 

取泮托拉唑影響因素樣品適量，加乙腈：水（50:50）稀釋至 0.2 mg/mL 后進(jìn)樣分析。

 

3．結(jié)果

 

 

Q Exactive Focus 具有快速、高效的正負(fù)切換能力。以圖 2 中 7.16 min 的色譜峰為例，正離子模式下檢測到 336.11500 m/z 雜質(zhì)的 [M+H]+ 信號，在負(fù)離子模式下除了檢測到相應(yīng)的 334.10177 m/z [M-H]- 信號外，還檢測到另一雜質(zhì) 320.08543 m/z 的 [M'-H]- 信號，表明快速的正負(fù)切換采集模式可以同時 獲得正離子和負(fù)離子雜質(zhì)的全面信息，同時由圖 1 質(zhì)量偏差可 見，無論是正離子還是負(fù)離子模式，Q Exactive Focus 都能保 持優(yōu)秀的質(zhì)量精度，為準(zhǔn)確鑒定提供了有力的保障。

在獲得母藥和雜質(zhì)的一級和二級質(zhì)譜信息后，軟件將調(diào)用碎裂數(shù)據(jù)庫（Fragmentation Library）快速的對泮托拉唑的碎片結(jié)構(gòu)進(jìn)行 歸屬，該數(shù)據(jù)庫幾乎涵蓋了所有已發(fā)表的文獻(xiàn)，保證了碎片解析的準(zhǔn)確性。在此研究結(jié)果之上，通過軟件對雜質(zhì)與泮托拉唑二級 質(zhì)譜信息之間的比對，可進(jìn)一步對雜質(zhì)變化位點(diǎn)進(jìn)行推測（圖 8）。通過 152、185 等共有碎片和 200、216 等特征差異碎片的比 對，推測出該雜質(zhì)為泮托拉唑砜（圖 9）。

圖 8. 二級質(zhì)譜碎片歸屬比對結(jié)果

 

 

圖 9. 雜質(zhì)泮托拉唑砜

 

 

使用上述解析流程，共檢測到泮托拉唑雜質(zhì) 15 個，其中可能的降解雜質(zhì) 9 個，可能的工藝雜質(zhì) 6 個（圖 10）。

圖 10. 泮托拉唑雜質(zhì)分類及鑒定結(jié)果匯總

 

 

4.1 Q Exactive Focus 質(zhì)譜儀將高性能四極桿與高分辨靜電場 軌道阱 Orbitrap 檢測技術(shù)相結(jié)合，能夠在保持高質(zhì)量精度和 靈敏度的前提下進(jìn)行快速的正負(fù)切換，獲得最全面的雜質(zhì)信 息。高性能四極桿能夠準(zhǔn)確快速的篩選母離子，進(jìn)而獲得高 專屬性的純凈二級質(zhì)譜圖。Orbitrap 技術(shù)具備高分辨高質(zhì)量精 度（HR/AM）的能力，本實(shí)驗中泮托拉唑雜質(zhì)質(zhì)量偏差 < 1.5 ppm，能夠準(zhǔn)確的生成雜質(zhì)元素組成，70,000 FWHM 的超高 分辨率可以分辨 A2 同位素中的 34S 和 18O+13C2，更有針對性的 對含 S 有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行鑒定。

 

4.2 Compound Discoverer 為 Thermo 新一代的智能小分子化 合物鑒定軟件，可針對不同項目建立特定的研究程式。根據(jù) 預(yù)設(shè)的分類因子，對不同影響因素放置條件下的樣品進(jìn)行便捷 的分組；根據(jù)研究需要設(shè)定自定義的工作流程樹，對預(yù)期的 可能雜質(zhì)和未知雜質(zhì)進(jìn)行提取分析；并在結(jié)果瀏覽中直觀的獲 得不同條件下樣品差異比對結(jié)果。通過調(diào)用豐富的碎裂數(shù)據(jù) （Fragmentation Library），可快速的對泮托拉唑碎片結(jié)構(gòu)進(jìn) 行了準(zhǔn)確推測和歸屬，通過對雜質(zhì)與泮托拉唑二級質(zhì)譜信息之 間的比對分析，可進(jìn)一步對雜質(zhì)變化位點(diǎn)進(jìn)行推測，最終獲得全面的雜質(zhì)鑒定結(jié)果。