李春麗 彭興
賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司

前言
蔬菜作為人們?nèi)粘Ｉ�活中必不可少的食品，其日常消費(fèi)量和市場(chǎng)需求量巨大。蔬菜種植過(guò)程中，為了提高蔬菜的產(chǎn)量，改善其品質(zhì)，施用農(nóng)藥不可避免，由于缺少施用常識(shí)及監(jiān)管措施，在農(nóng)藥的使用過(guò)程中存在濫用、誤用等不規(guī)范現(xiàn)象，種植者在農(nóng)藥的選擇上往往傾向于價(jià)格低廉，且高效的農(nóng)藥，而忽略了農(nóng)藥毒性及高殘留等問(wèn)題；另外，為了提高果蔬的產(chǎn)量和質(zhì)量，減少種植、采摘以及運(yùn)輸、存儲(chǔ)過(guò)程中的損失，種植者經(jīng)常多種高毒農(nóng)藥混配使用，而且加大了施藥用量和頻次，這不僅使得果蔬中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，并且加重了農(nóng)藥在產(chǎn)區(qū)周邊環(huán)境中的殘留，形成了難以逆轉(zhuǎn)的惡性循環(huán)。許多國(guó)家和國(guó)際性組織（CAC、歐盟、美國(guó)、日本和中國(guó)等）對(duì)農(nóng)藥的最大殘留限量（MRLs）進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定[1] 。蔬菜中農(nóng)藥殘留問(wèn)題，不僅成為食品安全領(lǐng)域面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，而且也制約了我國(guó)蔬菜產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易[2][3] 。因此，農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法已成為國(guó)內(nèi)及國(guó)際上的重點(diǎn)研究方向，許多檢測(cè)技術(shù)也應(yīng)運(yùn)而生。

有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是常用農(nóng)藥，包括多種高毒、劇毒農(nóng)藥及我國(guó)禁用農(nóng)藥。我國(guó)已頒布了 GBNY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》 [4] 的檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)參照此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，采用賽默飛世爾科技全新一代三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（TSQ 8000Evo）結(jié)合對(duì)應(yīng)的農(nóng)藥殘留篩查方法包（670 種化合物質(zhì)譜信息），對(duì)樣品中含有的有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行篩查，進(jìn)而對(duì)其中含有的相應(yīng)農(nóng)藥進(jìn)行確證和定量。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器和試劑
  質(zhì)譜儀：TSQ8000Evo 質(zhì)譜儀 ( 賽默飛世爾科技，美國(guó) )；
  氣相色譜儀：Trace1310 氣相色譜配 AI 1310 自動(dòng)進(jìn)樣器 ( 賽默飛世爾科技，美國(guó) )；
  色譜柱：TG-5SILMS 30 m×0.25 mm×0.25 μm毛細(xì)管色譜柱；
  試劑：正己烷，丙酮；

儀器方法
色譜方法
  程序升溫梯度：40℃ ( 維持 1.5 min)， 25℃ /min 到 90℃ ( 維持 1.5 min)， 25℃ /min 到 180℃ ( 維持 0 min)，5℃ /min 到280℃ ( 維持 0 min)，10℃ /min 到 300℃ ( 維持 5 min)
  進(jìn)樣口溫度 : SSL (270℃ ) Splitless
  載氣流速： 1.2 mL/min ( 恒流 )
  傳輸線溫度： 280 ℃
  進(jìn)樣體積：1.0 μL

質(zhì)譜方法
  離子源溫度：300 ℃。
  結(jié)合 RT-Alignment 功能的定時(shí)掃描 -SRM 模式（Timed -SRM）。
  運(yùn)用賽默飛世爾農(nóng)藥殘留方法包（含 670 種農(nóng)藥化合物質(zhì)譜方法）進(jìn)樣農(nóng)殘定性篩查和定量檢測(cè)。

樣品前處理方法

實(shí)驗(yàn)前處理方法參照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》。
具體前處理方法如下：
取可食部分，經(jīng)縮分后，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測(cè)樣；準(zhǔn)確稱取 25.0 g，加入 50.0 mL乙腈，高速均質(zhì) 2 min 后過(guò)濾，濾液中加入 5-7g 氯化鈉，震蕩，靜置；取上清液 10 mL，80℃水浴加熱，氮?dú)饣蚩諝鉂饪s至干；加入 2.0 mL 丙酮，轉(zhuǎn)移至 15 mL，3.0 mL 丙酮洗三次，定容至 5.0 mL，過(guò) 0.2 μm 濾膜后待檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

快速篩查方法建立
農(nóng)藥殘留方法包中包含了 670 種農(nóng)藥化合物優(yōu)化后的相關(guān)信息，包括離子對(duì)（母離子和子離子）、碰撞能量、掃描時(shí)間、駐留時(shí)間及監(jiān)測(cè)反應(yīng)離子的數(shù)目等一系列質(zhì)譜參數(shù)。利用 TSQ8000Evo 氣質(zhì)聯(lián)用儀的高速掃描，采用特有的 Timed -SRM 模式，快速建立儀器采集方法，如圖 1，圖 2 所示。

農(nóng)藥種類確定途徑
Trace Finder 軟件結(jié)合農(nóng)藥殘留方法包可直接、快速建立數(shù)據(jù)處理方法。對(duì)采集樣品的數(shù)據(jù)進(jìn)行快速處理，確定所含農(nóng)藥的具體種類以及相應(yīng)的保留時(shí)間。如圖 3 所示。


篩查方法驗(yàn)證
首先應(yīng)用上述建立好的快速篩查方法，對(duì)基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)磷 ( 濃度 8 μg/kg），有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類 ( 濃度 10μg/kg）進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，使用 Trace Finder 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，確定了 18 種有機(jī)磷農(nóng)藥及 17 種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥離子對(duì)信息，如表 1 所示。根據(jù)確認(rèn)的農(nóng)藥信息優(yōu)化儀器采集方法，對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行定量檢測(cè)分析，以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)對(duì)其他樣品進(jìn)行定量。檢測(cè)的實(shí)際樣品共 12 個(gè)（依照標(biāo)準(zhǔn)，有機(jī)磷、有機(jī)氯及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥分別進(jìn)行樣品前處理。每個(gè)樣品有 2 個(gè)濃度，每個(gè)濃度 3 個(gè)平行樣品。）。

色譜分離結(jié)果
實(shí)驗(yàn)所采用的 TG-5SILMS 色譜柱對(duì)農(nóng)藥化合物有良好的分離效果。35 種農(nóng)藥在 2 個(gè)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（濃度≤ 10 μg/kg）樣品中均得到了良好的色譜圖，如圖 4 所示。本實(shí)驗(yàn)在保證了農(nóng)藥化合物分離的同時(shí)，避免了基質(zhì)中干擾物質(zhì)的影響，使定性結(jié)果達(dá)到方法要求，真實(shí)可靠。

定性結(jié)果
按照歐盟方法指令[5] ，質(zhì)譜方法的確證要求必須達(dá)到 4個(gè)定性點(diǎn)，表 2 及表 3 列出了具體判定標(biāo)準(zhǔn)及常見(jiàn)檢測(cè)方式的定性點(diǎn)數(shù)量要求。對(duì)于 GC-MS/MS，3對(duì)離子對(duì)的定性點(diǎn)有 5-6 個(gè)，完全達(dá)到了相關(guān)方法的要求。因此，實(shí)現(xiàn)了良好的定性效果。圖 5，圖 6，圖 7 為樣品中農(nóng)藥丙溴磷、林丹及氯氟氰菊酯特征離子色譜圖及離子比率圖。



定量結(jié)果
Trace Finder 軟件可以在確定農(nóng)藥種類的同時(shí)對(duì)樣品中含有的農(nóng)藥殘留進(jìn)行準(zhǔn)確定量。使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)樣品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行定量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，針對(duì)特定化合物儀器的定量水平達(dá)到 1 μg/kg 以下，完全滿足日常農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求（10 μg/kg），并且在低濃度時(shí)也能獲得良好的譜圖效果和穩(wěn)定的重復(fù)性。實(shí)際樣品檢測(cè)到的各目標(biāo)物農(nóng)藥濃度如表 4 所示。

儀器穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
將2個(gè)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品各連續(xù)進(jìn)樣10次，計(jì)算每個(gè)目標(biāo)物濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），測(cè)試儀器的穩(wěn)定性，如圖 8 所示。結(jié)果顯示，所有農(nóng)藥化合物 RSD 均在 20%以下。35 種農(nóng)藥化合物 RSD＜ 15%，占總數(shù)的 91.4%。儀器在低濃度水平（≤ 10 μg/kg）連續(xù)進(jìn)樣的結(jié)果顯示，儀器穩(wěn)定性良好，滿足檢測(cè)需求。