擁擠的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境影響擴(kuò)散介導(dǎo)的細(xì)胞過(guò)程，例如代謝、信號(hào)傳導(dǎo)以及運(yùn)輸?shù)�。在非均相的�?xì)胞漿內(nèi)，針對(duì)大分子擴(kuò)散阻滯的現(xiàn)象已有研究，但是有關(guān)擴(kuò)散分布的細(xì)節(jié)及其起源尚不清楚。中科院物理所Peng-Ye Wang課題組基于量子點(diǎn)（Quantum Dots, QDs）的單顆粒示蹤（Single-particle tracking, SPT）技術(shù)，描繪了單個(gè)細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)散圖譜，揭示了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的不均一性，并發(fā)現(xiàn)量子點(diǎn)在細(xì)胞漿內(nèi)的區(qū)域化擴(kuò)散，而該區(qū)域化的形成則來(lái)自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Endoplasmic Reticulum, ER）微管網(wǎng)絡(luò)所界定的微米級(jí)區(qū)劃。

Hui Li等利用胞飲囊泡的滲透裂解方法，將量子點(diǎn)導(dǎo)入A549細(xì)胞，量子點(diǎn)在細(xì)胞漿內(nèi)各自分散，沒(méi)有包封于內(nèi)吞通路或囊泡中（圖1）；然后以單顆粒示蹤技術(shù)檢測(cè)量子點(diǎn)的擴(kuò)散系數(shù)，發(fā)現(xiàn)該系數(shù)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)密度呈顯著負(fù)相關(guān)，擴(kuò)散系數(shù)的峰點(diǎn)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)密度的低點(diǎn)相一致（圖2）；造成量子點(diǎn)區(qū)域化擴(kuò)散的原因是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)微管網(wǎng)絡(luò)的阻礙，若以藥物破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)，量子點(diǎn)擴(kuò)散范圍增加；因此，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)使細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散更加一致、有序。總之，該研究證實(shí)了量子點(diǎn)在細(xì)胞漿的區(qū)域化擴(kuò)散，是關(guān)于細(xì)胞內(nèi)大分子擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)的新發(fā)現(xiàn)，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散分布的描繪，可用于基于納米顆粒的藥物遞送與治療的策略研發(fā)。

圖1 將量子點(diǎn)遞送入A549細(xì)胞，并示蹤單個(gè)量子點(diǎn)以檢測(cè)擴(kuò)散系數(shù)。

（a）A549細(xì)胞的明場(chǎng)（左圖）及熒光（右圖）圖像。通過(guò)胞飲過(guò)程，鏈霉親和素（Streptavidin, SA）耦聯(lián)的量子點(diǎn)QD655遞送入細(xì)胞漿，細(xì)胞形態(tài)保持正常，量子點(diǎn)在細(xì)胞漿彌散分布。黃線勾畫(huà)出細(xì)胞輪廓。（b）SA-QD655（紅色）與SA-QD525（綠色）共同遞送入A549細(xì)胞。（c）單量子點(diǎn)相對(duì)時(shí)間的位置。時(shí)間分辨率為30ms，箭頭指示靜止時(shí)段，其中小圖為對(duì)應(yīng)的量子點(diǎn)成像，白線顯示量子點(diǎn)的運(yùn)行軌跡。（d）與c圖中量子點(diǎn)軌跡對(duì)應(yīng)的擴(kuò)散系數(shù)D、指數(shù)a以及對(duì)應(yīng)不同時(shí)間的強(qiáng)度，箭頭指示靜止時(shí)段。（e）在23個(gè)A549細(xì)胞中全部SA-QD655的平均MSD，其中小圖為隨機(jī)選取的100個(gè)樣品的MSD曲線。（f）量子點(diǎn)固定于玻璃上，或于Ficoll 70（30wt%）或細(xì)胞中擴(kuò)散，描繪量子點(diǎn)的時(shí)間指數(shù)a的分布。

圖2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）使細(xì)胞內(nèi)量子點(diǎn)呈現(xiàn)區(qū)域化擴(kuò)散。

（a）在A549細(xì)胞的第一層面，綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與量子點(diǎn)（紅色）的合圖。（b）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光成像和擴(kuò)散圖轉(zhuǎn)換為灰階圖像以進(jìn)行定量比較。（c）b圖中劃線區(qū)域的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光強(qiáng)度與擴(kuò)散系數(shù)Dp呈負(fù)相關(guān)。（d）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光強(qiáng)度及擴(kuò)散系數(shù)的相關(guān)系數(shù)。（e）a圖方框區(qū)域內(nèi)量子點(diǎn)軌跡（紅色）與GFP-ER（綠色）疊加的系列圖像。（f）由e圖軌跡描繪的擴(kuò)散圖譜。（g）GFP-ER（綠色）與量子點(diǎn)（紅色）在第二層面的合圖。黃色線條顯示細(xì)胞邊界，核區(qū)域以N標(biāo)注。

文獻(xiàn)來(lái)源：

Li H, Dou SX, Liu YR, Li W, Xie P, Wang WC, Wang PY. Mapping intracellular diffusion distribution using single quantum dot tracking: compartmentalized diffusion defined by endoplasmic reticulum. J Am Chem Soc. 2015;137(1):436-44.