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綠色熒光蛋白(GFP)在科學(xué)研究上的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):5228 發(fā)布日期:2016-6-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein,簡稱GFP)bs-2194P是一種能在藍(lán)色波長光線激發(fā)下發(fā)出熒光的特殊蛋白質(zhì),正是這種神奇的性質(zhì),讓它成為當(dāng)今生物化學(xué)領(lǐng)域最有力的工具之一,被稱為“生物北斗”。

GFP在科學(xué)研究上有著驚人的用途,因為它能夠使我們直接看到細(xì)胞內(nèi)部的運動、分布情況。在任何指定的時間我們都可以輕易地找出GFP的定位和存在:你只需要用紫外光去照射,這時所有的GFP都將發(fā)出鮮艷的綠色光芒。顯微鏡下的微觀世界與我們看到的宏觀世界極為不同,而GFP的作用是在微觀與宏觀間架起一座橋梁,讓科學(xué)家通過觀察發(fā)光效應(yīng)推測出物質(zhì)在分子水平上的活動。讓生物化學(xué)家們在研究細(xì)胞、蛋白、基因的水平上,從顯微鏡下獲得滿意的結(jié)果。 綠色螢光蛋白在細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)領(lǐng)域中,通常被用作為一個報導(dǎo)基因(reporter gene)。一些經(jīng)修飾過的型式可作為生物探針,由于GFP熒光有著生物細(xì)胞的自主功能,其熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告的蛋白是無法比擬的。

簡單做個實驗:把GFP連接到你有興趣觀察的任何對象上。比如,你可以把它連接到一種病毒上。然后,隨著病毒在宿主體內(nèi)不斷擴散,你就可以通過跟蹤發(fā)出的綠色螢光來觀察病毒的擴散途徑;或者你把它接合到一種蛋白質(zhì)上并通過顯微鏡觀察它在細(xì)胞內(nèi)部的移動或遷移。

GFP在腫瘤發(fā)病機制研究中的應(yīng)用

GFP是一個分子量較小的蛋白,易與其他一些目的基因形成融合蛋白且不影響自身的目的基因產(chǎn)物的空間構(gòu)象和功能。GFP與目的基因融合,將目的基因標(biāo)記為綠色,若將熒光蛋白植入到動物的某個細(xì)胞的DNA分子結(jié)構(gòu)中,可定量分析目的基因的表達水平,顯示其在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達位置和量的變化,為探討該基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其分子機制,提供了便利條件。在腫瘤的形成過程中,增殖和凋亡是一對相互矛盾的統(tǒng)一體。若腫瘤細(xì)胞凋亡占優(yōu)勢,腫瘤組織將長期處于休眠狀態(tài)或自行消亡。腫瘤細(xì)胞的凋亡受凋亡相關(guān)基因調(diào)控。用GFP轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)基因,并與正常組織進行比較,則大致可判斷此基因為抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的基因;反之,為促進腫瘤細(xì)胞凋亡的基因。腫瘤細(xì)胞浸潤是腫瘤細(xì)胞粘連、酶降解、移動和基質(zhì)內(nèi)增殖等一系列過程的表現(xiàn),其根本原因在于腫瘤細(xì)胞內(nèi)某些基因表達異常。利用GFP 的示蹤特性,研究腫瘤細(xì)胞內(nèi)某些基因異常表達與腫瘤細(xì)胞浸潤的關(guān)系,即可揭示腫瘤細(xì)胞浸潤的某些機制。

來源:北京博奧森生物技術(shù)有限公司
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