簡(jiǎn)介
使用QPix400系統(tǒng)可以進(jìn)行常規(guī)的液體樣品相同微孔板之間的文庫復(fù)制(比如從96復(fù)制到96孔板,從384復(fù)制到384孔板)。但是,將文庫樣品從瓊脂平板到瓊脂平板進(jìn)行固體到固體的復(fù)制方式也是一個(gè)很有用的工具,比如可以進(jìn)行基因抗性的篩選,或者進(jìn)行酵母雙雜交篩選。本文描述了如何在QPix400系統(tǒng)上面進(jìn)行文庫復(fù)制操作(Figure 1),比如將樣品從液體復(fù)制到固體,從固體復(fù)制到固體。
將液體樣品復(fù)制到瓊脂固體平板
將E.coli樣品在含有Amp的10ml LB 培養(yǎng)基中37度過夜培養(yǎng)。然后,分別取100ulE.coli 樣品到標(biāo)準(zhǔn)96孔板。為了完成本次實(shí)驗(yàn),使用了QPix420系統(tǒng)的復(fù)制重排軟件模塊以及點(diǎn)樣頭模塊(Gridding head)。樣品板含有培養(yǎng)后的液體樣品,目標(biāo)微孔板為空的瓊脂平板,用于接種樣品板中的樣品。
優(yōu)勢(shì)
文庫復(fù)制過程中,設(shè)置合適的接種高度非常重要。對(duì)于樣品來源板來說,接種高度要設(shè)置到點(diǎn)樣針頭能夠充分接觸到96孔板中的液體E.coli樣品。對(duì)于目標(biāo)固體平板來說,接種高度要設(shè)置到點(diǎn)樣針頭剛好接觸到OmniTray的L B 瓊脂固體平板(Figure 2)。在文庫復(fù)制操作完成后,在瓊脂平板上可以清晰看到接種樣品的點(diǎn)樣位置痕跡(Figure 3A)。37度培養(yǎng)2天后,可以看到經(jīng)過接種的OmniTray LB瓊脂平板上,E.coli樣品生長(zhǎng)良好(Figure 3B)。
Figure 3.完成液體E.coli樣品從標(biāo)準(zhǔn)96孔板復(fù)制到OmniTray LB瓊脂固體平板后OmniTray平板的照片:A)接種完成后,OmniTray平板上可以清晰看到96接種針的樣品位置痕跡。B)同一塊OmniTray平板經(jīng)過37度2天培養(yǎng)后,每一個(gè)接種的樣品位置都可以看到明顯的生長(zhǎng)后的E.coli克隆,說明文庫復(fù)制操作可以成功將液體E.coli樣品從96孔樣品板轉(zhuǎn)移到OmniTray LB瓊脂固體平板
瓊脂到瓊脂固體平板復(fù)制
為了將OmniTray LB瓊脂平板上的樣品復(fù)制到OmniTray LB瓊脂平板,同樣使用了QPix420系統(tǒng)的文庫復(fù)制模塊和點(diǎn)樣頭模塊。液體到固體復(fù)制同樣的接種高度也可以用于固體到固體復(fù)制的來源板和目標(biāo)板。來源板含有12*8矩陣樣式的E.coli克隆(如Figure 3B所示)。使用文庫復(fù)制模塊將來源板的克隆接種到另一塊OmniTrayLB瓊脂平板,目標(biāo)板在接種后可以清晰看到96個(gè)接種樣品痕跡。過夜培養(yǎng)后,96個(gè)接種樣品點(diǎn)都可以清晰看到生長(zhǎng)良好的
E.coli克隆(Figure 4)。這說明QPix420系統(tǒng)可以成功的將來源OmniTray平板上的E.coli克隆轉(zhuǎn)移到目標(biāo)OmniTray平板上,實(shí)現(xiàn)固體到固體平板的克隆復(fù)制。
Figure 4.固體到固體瓊脂平板復(fù)制完成后目標(biāo)OmniTray克隆圖片。目標(biāo)OmniTray經(jīng)過37度過夜培養(yǎng)后,96個(gè)接種的E.coli樣品都可以正常生長(zhǎng),說明QPix420系統(tǒng)可以成功將OmniTray LB平板上的克隆樣品復(fù)制到目標(biāo)OmniTray LB瓊脂平板。
結(jié)論
QPix400系列微生物克隆篩選系統(tǒng)可以通過文庫復(fù)制模塊以及點(diǎn)樣頭模塊快速、準(zhǔn)確實(shí)現(xiàn)液體到固體、固體到固體自動(dòng)化樣品復(fù)制操作。