實驗原理 　　
高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。
 
在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低（表Ⅵ-2），二是濕熱的穿透力比干熱大（表Ⅵ-3）；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100℃時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出2．26kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。
   
一般培養(yǎng)基用1．05kg /cm2，121．3℃15—30分鐘可達到徹底滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。例如含糖培養(yǎng)基用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃滅菌15分鐘，但為了保證效果，可將其他成分先行121．3℃，20分鐘滅菌，然后以無菌操作手續(xù)加入滅菌的糖溶液。又如盛于試管內(nèi)的培養(yǎng)基以1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘即可，而盛于大瓶內(nèi)的培養(yǎng)基最好以1．05kg/cm2滅菌30分鐘。

蒸汽壓力所用單位為kg/cm2（千克/厘米2），它與lb/in2（磅/英寸2）和溫度的換算關(guān)系見表Ⅵ-5。
 
實驗室中常用的高壓蒸汽滅菌鍋有立式、臥式和手提式等幾種，其構(gòu)造如圖Ⅵ-4。本實驗介紹手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法。

實驗試劑 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

實驗設(shè)備 手提式高壓蒸汽菌鍋等

實驗材料 培養(yǎng)皿（6套一包）

實驗步驟　　
      1．首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。
　　2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
　　3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。
　　4．用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。
　　5．滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。
　　6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37℃溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。

注意事項  檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。