移液器的不同操作細(xì)節(jié)對(duì)移液精度的影響不同,如果全部按照粗略講述的一些操作規(guī)范來(lái)做,必然會(huì)影響操作的效率。所以,我這里把相關(guān)的一些使用規(guī)則按照其重要性進(jìn)行分類:“重點(diǎn)注意事項(xiàng)”是一定要遵守的,但如果對(duì)精度要求不高,就不必遵守“其它注意事項(xiàng)”而按照效率優(yōu)先的原則來(lái)操作。這兩類注意事項(xiàng)則分別按照操作的順序排列。下面是重點(diǎn)注意事項(xiàng):
1. 裝吸頭
在移液器的套柄最下端進(jìn)入吸頭后,如果在吸頭盒內(nèi)操作,在輕輕向下壓的同時(shí)左右晃動(dòng)移液器或稍稍轉(zhuǎn)動(dòng)移液器(僅單道移液器可旋轉(zhuǎn))1-2秒即可;如果是用散裝吸頭,在用手把吸頭往移液器方向輕輕施壓的同時(shí)稍稍轉(zhuǎn)動(dòng)吸頭1-2秒即可。如果這種操作不能達(dá)到理想的密封性,就需要檢查吸頭和移液器了(以后會(huì)詳述)。
2. 量程選擇
一般說(shuō)來(lái),移液器的可用量程范圍是移液器最大量程的10-100%。對(duì)特定的一支移液器,其移液的精度隨移液量的降低而降低。以市場(chǎng)上用的較普遍的EPPENDORF的RESEARCH移液器為例,其量程范圍為20-200ul的移液器,在移取200ul純水時(shí)準(zhǔn)確度為±0.6%,在移取100ul純水時(shí)準(zhǔn)確度為±1.0%,在移取20ul純水時(shí)準(zhǔn)確度為±2.5%(這些數(shù)據(jù)引用自EPPENDORF的產(chǎn)品宣傳手冊(cè))。因此,筆者推薦最佳的量程范圍是移液器最大量程的35-100%。
3. 吸液的速度
在吸液過(guò)程中,須慢慢降低拇指的下壓力,使液體在吸頭內(nèi)均勻且緩慢的上升。
4. 吸液的深度和角度
(1) 吸頭浸入的深度:有下面一個(gè)表格供參考(當(dāng)然,不同容器需要的深度也略有不同,所以無(wú)需死記這個(gè)表格,只需把握兩個(gè)原則:其一,吸液的深度需保證達(dá)到所需的移液量;其二,讓吸頭外壁盡量少的接觸液體)。
(2) 移液的角度:在移液的過(guò)程中須一直保持移液器在豎直狀態(tài),最大傾角不超過(guò)20?。
5. 停留時(shí)間
對(duì)于大量程移液(ml級(jí))和粘度明顯高于水樣品的移液,在吸液時(shí)松開拇指后,須使吸頭在液體內(nèi)停留3-5秒后才能移出(因?yàn)橐后w進(jìn)入吸頭的運(yùn)動(dòng)相對(duì)比較費(fèi)時(shí),必須保證液體達(dá)致動(dòng)態(tài)平衡)。
6. 存放
在移液器使用完畢后,須將移液器調(diào)至最大量程,然后掛起(可以掛在專用支架上,也可以掛在實(shí)驗(yàn)臺(tái)柜的金屬橫桿上)。