振動切片方法及與石蠟、冰凍切片的比較
瀏覽次數(shù):6321 發(fā)布日期:2013-12-27
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振動切片用振動切片機,可以把新鮮組織(不固定不冰凍)切成厚片20~10μm,以漂浮法在反應(yīng)板進行免疫組織化學(xué)染色,然后在解剖顯微鏡下檢出免疫反應(yīng)陽性部位,修整組織進行后固定,最后按電鏡樣品制備、脫水、包埋、超薄切片、染色觀察等。組織不冰凍,無冰晶形成和組織抗原破壞,在免疫組化染色前避免了組織脫水、透明、包埋等步驟對抗原的損害,能較好地保留組織內(nèi)脂溶性物質(zhì)和細胞膜抗原,主要用于顯示神經(jīng)系統(tǒng)抗原分布研究。醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理這種包埋前染色,尤其適用于免疫電鏡觀察。
振動切片方法是利用刀片振動原理,用來將新鮮的活體組織或固定過的組織切成20微米的薄片到1毫米以上厚片的儀器。一般厚度精度控制大約為1微米,如果做熒光染色建議切成薄片。
對于成年小鼠或胚胎腦部、脊髓、肝臟、眼睛及其他器官組織,我們的方法是用低熔點瓊脂糖包埋,然后將封裝在瓊脂糖里的組織進行切片,取下的組織厚片可以浸泡在如六孔板內(nèi)進行組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)染色。然后,用激光掃描共聚焦顯微鏡或雙光子顯微鏡等進行觀察。而對于或新鮮活體組織則不需要包埋,直接固定在切片槽中切片。
與石蠟切片、冰凍切片方法比較:
振動切片方法簡單、快速,能使組織比較完整保留,適合做或組織電生理學(xué)等研究。與冰凍切片相比,不需要對組織冷凍,不會形成冰晶或造成組織抗原的破壞。與石蠟切片相比,不需要脫水、透明、浸蠟等過程,避免對抗原的損害。