丁娟娟 紀(jì)英華 趙嘉胤 莊淑萁
沃特世科技（上海）有限公司

 

摘要：2008年，三鹿奶粉被爆檢出對(duì)人體有害的三聚氰胺，一時(shí)間震驚全國。自此，國家一直在加強(qiáng)對(duì)奶粉中三聚氰胺的監(jiān)管。2013年初，新西蘭牛奶及奶制品被檢測(cè)出含有低含量的有毒物質(zhì)雙氰胺，新西蘭政府已經(jīng)下令禁售含有雙氰氨的奶類產(chǎn)品。

沃特世（Waters^®）公司一直致力于保障人類的健康生活，第一時(shí)間開發(fā)了奶粉中雙氰胺和三聚氰胺同時(shí)檢測(cè)的方法，以提高檢測(cè)分析的有效性。

二氰二氨（雙氰胺），縮寫DICY或DCD。是氰胺的二聚體，也是胍的氰基衍生物�；瘜W(xué)式C₂H₄N₄。白色結(jié)晶粉末。可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，幾乎不溶于醚和苯。

三聚氰胺，俗稱密胺、蛋白精，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，被用作化工原料。微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚類，對(duì)身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。

分析難點(diǎn)：
對(duì)于同時(shí)分析奶粉中雙氰胺和三聚氰胺，其主要難點(diǎn)在于雖然兩者均為極性物質(zhì)，都需要使用HILIC色譜分離模式，但根據(jù)之前的經(jīng)驗(yàn)，三聚氰胺在BEH HILIC色譜柱上保留和峰形較好，而雙氰胺在BEH Amide色譜柱上保留和峰形較佳。因此需要建立一個(gè)統(tǒng)一的LCMSMS方法用于分析雙氰胺和三聚氰胺，并獲得更好的峰形和靈敏度。

另一方面，傳統(tǒng)的三聚氰胺方法是采用Oasis^® MCX這種反相和陽離子交換的復(fù)合SPE模式，然而這種方法完全不適用于雙氰胺；而Sep-Pak^® AC2小柱雖然可以用于雙氰胺的凈化和富集，但仍需開發(fā)一個(gè)更為快速的前處理方法。

實(shí)驗(yàn)方法：
儀器：Waters ACQUITY UPLC^® with Xevo^® TQ-S
色譜柱：ACQUITY BEH Amide column，1.7μm, 2.1*150mm
流動(dòng)相A： 5mM甲酸銨 0.1%甲酸水溶液
流動(dòng)相B：乙腈
流速：0.4mL/min
柱溫：35℃
進(jìn)樣體積：5μL
梯度曲線：

質(zhì)譜參數(shù)：
毛細(xì)管電壓：2.5kv
脫溶劑氣溫度：500度
脫溶劑氣流速：8 00 L/Hr
碰撞氣流速：0.15mL/min

樣品前處理方法：

為達(dá)到快速、高效的檢測(cè)目的，本實(shí)驗(yàn)采用Waters DisQuE樣品制備試劑盒。
Waters DisQuE樣品制備流程如下：

本實(shí)驗(yàn)在未添加同位素內(nèi)標(biāo)的情況下，空白基質(zhì)添加1ppb樣品濃度，測(cè)得雙氰胺平均回收率為83%，三聚氰胺平均回收率為71%。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：
本文采用沃特世超高效液相色譜UPLC^®與高靈敏度三重四極桿Xevo TQ-S，開發(fā)了同時(shí)分析奶粉中雙氰胺和三聚氰胺的檢測(cè)方法，此方法建立在HILIC機(jī)理的BEH Amide色譜柱上。對(duì)于基質(zhì)中添加1ppb的待測(cè)物，經(jīng)過DisQuE基質(zhì)分散樣品制備盒凈化后進(jìn)樣，不但峰形良好、不受基質(zhì)干擾影響，靈敏度也完全滿足檢測(cè)要求。

為了達(dá)到快速、高效的分析目的，本文采用DisQuE基質(zhì)分散樣品制備盒，樣品經(jīng)簡(jiǎn)單的蛋白沉淀后加入到DisQuE試劑盒中凈化，之后直接進(jìn)樣即可，無需揮干復(fù)溶。方法簡(jiǎn)單、快速，尤其對(duì)于大批量樣品的檢測(cè)，該方法可以大大提高分析效率。

在LCMSMS方法開發(fā)中，雜化顆粒的HILIC模式色譜柱起到了很大作用，首先兩種待測(cè)物均為極性化合物，反相色譜無法保留，HILIC提供了一個(gè)互補(bǔ)的選擇。其次在眾多HILIC模式色譜柱中，BEH Amide色譜柱為雜化顆粒技術(shù)，pH耐受范圍廣（pH 1-10），為方法開發(fā)提供了更大的空間，且BEH Amide在此應(yīng)用中具有更好的選擇性和峰形。