丁娟娟、紀(jì)英華、王冰、蔡麒
沃特世科技（上海）有限公司

摘要
2013年1月，新西蘭牛奶及奶制品被檢測出含有少量的有毒物質(zhì)雙氰胺，新西蘭政府已經(jīng)下令禁售含有雙氰胺的奶類產(chǎn)品。由于中國是新西蘭奶制品的出口大國，所以這一敏感的食品安全問題又一次觸動(dòng)了全中國人民的心。沃特世（Waters^®）公司第一時(shí)間推出完整解決方案，為廣大客戶提供有力的分析手段。二氰二氨（俗稱雙氰胺），縮寫DICY或DCD，是氰胺的二聚體，也是胍的氰基衍生物。化學(xué)式C₂H₄N₄，白色結(jié)晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，幾乎不溶于醚和苯。不可燃，干燥時(shí)穩(wěn)定。

分析難點(diǎn)
雙氰胺極性非常大，傳統(tǒng)C₁₈色譜柱及HILIC色譜柱均難以保留，對于復(fù)雜的奶制品基質(zhì)來說會(huì)與雜質(zhì)共流出，影響分析目標(biāo)化合物的定量和定性。沃特世公司BEH Amide系列色譜柱通過三鍵鍵合的酰胺基鍵合相，親水作用色譜的原理，使得雙氰胺得到非常好的保留。

實(shí)驗(yàn)方法
一、樣品前處理方法：
取1g奶粉加10mL 1%三氯乙酸溶解并沉淀蛋白，12,000轉(zhuǎn)高速離心10min；取2mL上清液上樣到SepPak^® AC2小柱上（Sep-pak AC2上接30mL儲(chǔ)液器，wat011390），按照如下流程操作。方法回收率91%。

二、儀器方法:
UPLC^® 方法：
儀器： ACQUITY UPLC^®
流動(dòng)相A： 0.05%乙酸水
流動(dòng)相B： 0.05%乙酸乙腈
色譜柱： BEH Amide 2.1×150 mm 1.7 μm
流速： 0.3 mL/min
柱溫： 30℃
進(jìn)樣體積： 5 μL
梯度曲線：

MS參數(shù)：
毛細(xì)管電壓： 3.5 kv
脫溶劑氣溫度： 400 ℃
脫溶劑氣流速： 900 L/hr
碰撞氣流速： 0.2 mL/min

檢測過程中發(fā)現(xiàn)，乳制品基質(zhì)即使做過凈化處理，背景干擾依然很嚴(yán)重，所以在檢測過程中開啟RADAR功能，實(shí)時(shí)監(jiān)測雜質(zhì)對目標(biāo)化合物的干擾及背景基質(zhì)的影響。

 

此圖為同時(shí)檢測目標(biāo)化合物的多反應(yīng)檢測通道及基質(zhì)全掃描圖，目標(biāo)化合物雙氰胺出峰時(shí)間背景干擾不明顯，使離子抑制效應(yīng)減到最低。

檢測利器2——PICs功能（子離子確認(rèn)掃描）
在檢測目標(biāo)化合物的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，物質(zhì)本身分子量小，乳制品中干擾物質(zhì)多，干擾嚴(yán)重，不可避免地會(huì)出現(xiàn)假陽性的情況，此時(shí)會(huì)選擇高分辨質(zhì)譜進(jìn)行分子量和結(jié)構(gòu)的剖析，沃特世Xevo^®系列串聯(lián)四極桿質(zhì)譜可提供碎片離子信息，使一次進(jìn)樣即可完成化合物的多重定性。

由圖中可以看出，溶劑標(biāo)準(zhǔn)品和奶粉樣品的PICs質(zhì)譜圖中主要碎片離子相同，各碎片離子之間相對強(qiáng)度比也在誤差范圍內(nèi)，擬合度匹配良好，可以確認(rèn)是陽性樣品。這樣對于只提供兩對離子對比的單一定性方法來說多了一種定性功能，使數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確。

結(jié)論
雙氰胺極性非常大，傳統(tǒng)C₁₈色譜柱及HILIC色譜柱均難以保留，而沃特世公司Amide系列色譜柱通過三鍵鍵合的酰胺基鍵合相，親水作用色譜的原理，使得雙氰胺得到非常好保留。而儀器對于復(fù)雜基質(zhì)中殘留物的分析又作了更好的詮釋，例如用于實(shí)時(shí)檢測背景基質(zhì)干擾的RADAR功能及多重定性選擇的PICs功能，都能很好地應(yīng)用在我們的實(shí)際工作中，使我們的工作事半功倍。