非整合型慢病毒——新型基因研究工具

常規(guī)慢病毒載體能高效感染分裂細胞和非分裂細胞，將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實現(xiàn)持久性表達。然而這種隨機整合會帶來插入突變的風(fēng)險。于是，研究人員也期望用到非整合型的慢病毒包裝系統(tǒng)。

百恩維生物對整合酶蛋白進行突變，推出了整合酶缺陷型的慢病毒包裝系統(tǒng)（非整合型慢病毒）。非整合型慢病毒在目的細胞中產(chǎn)生了環(huán)狀附加體，這些載體在分裂細胞中瞬時表達，但在非分裂細胞中穩(wěn)定表達。與整合型慢病毒相比，非整合型慢病毒導(dǎo)致插入突變的風(fēng)險大大降低，適合iPS研究、RNA干擾、同源重組等領(lǐng)域。

非整合型慢病毒包裝系統(tǒng)屬于第四代的包裝系統(tǒng)，它將pol基因也分離出來，使gag、pol和env成為三個獨立載體，而不是兩個載體，從而大大降低了產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒的可能性，進一步提高了生物安全性。此系統(tǒng)與其他慢病毒載體配套使用可以制備出高滴度的慢病毒顆粒，無需濃縮即可達到 5x10⁸ IU/ml。之所以能制備高滴度的病毒顆粒，主要有以下三個關(guān)鍵因素。

首先，非整合型慢病毒系統(tǒng)中各載體的比例是經(jīng)過優(yōu)化的，極大地提高了病毒包裝所需蛋白的表達量。其次，引入了Tet-Off轉(zhuǎn)錄激活子(tTA)，形成病毒包裝蛋白的級聯(lián)放大表達效應(yīng)，極大地提高了病毒包裝蛋白的表達量。第三，百恩維生物擁有轉(zhuǎn)染效率高極高的轉(zhuǎn)染試劑，可以高效地轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T包裝細胞系，制備出高滴度的慢病毒顆粒。本系統(tǒng)可以與任何慢病毒表達載體相兼容。

非整合型慢病毒主要優(yōu)點：

• 高效的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，不會插入宿主基因組
• 插入突變的風(fēng)險低
• 采用VSV-G包膜，宿主范圍廣泛
• 分裂細胞中的瞬時表達，非分裂細胞中的穩(wěn)定表達
• 與任何慢病毒載體配套使用，產(chǎn)生非整合型的慢病毒
• 產(chǎn)生高滴度慢病毒

簡而言之，非整合型慢病毒高表達目的基因，又不會引起突變，是一種非常有效的基因研究工具。

作為病毒包裝領(lǐng)域的佼佼者，百恩維生物還有逆轉(zhuǎn)錄病毒，是基因研究技術(shù)服務(wù)的理想選擇。