光譜移液器與光纖分光光度計用于DNA/RNA定量檢測

瀏覽次數(shù)：4912　發(fā)布日期：2011-7-29　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

摘要

在紫外光及可見光光源下，用光譜移液器（WPI-SPT-2）在光纖分光光度計（TIDAS-1）中測量溶液中DNA的濃度（31µg/mL和144µg/mL）。由于只有1厘米光程，借助光譜移液器的使用不需要在此濃度范圍內(nèi)進行測量前的稀釋，因此可以消除潛在的誤差。由于光譜移液器設(shè)計小巧，可以在標(biāo)準(zhǔn)的200µL的PCR小管內(nèi)對10µL的樣本進行常規(guī)檢測，甚至如果在PCR小管中對電極的尖端位置足夠小心，像5µL 這樣小的樣本都可以重復(fù)測量。

實驗過程

DNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液（Sigma D1626）通過重力方法應(yīng)用18.2MΩ/cm超純水作為溶劑來制備，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度在0.0µg/mL和143.9µg/mL 之間。應(yīng)用光譜移液器對一式三份溶液進行測量，并將光譜移液器連接到裝配紫外及可見光光源的光纖分光光度計上。數(shù)據(jù)在儀器全波段范圍內(nèi)（190nm-720nm）每增加1nm收集一次，儀器必須對產(chǎn)生總量80%吸光度的溶液進行測量，所有測量使用18.2 MΩ/cm超純水作為參考溶液。

結(jié)果

實驗結(jié)果如下表

Table 1: DNA 濃度和吸光度值

DNA [µg/mL]	260 nm吸光度 [AU]
0.00	-0.0061 ± 0.0001
30.83	0.5745 ± 0.0011
56.59	1.0309 ± 0.0020
85.49	1.4497 ± 0.0016
115.66	1.7170± 0.0025
143.94	1.8280 ± 0.0006

因為吸光度與濃度關(guān)系遵循Beer-Lambert定律，也即：

A= εlc
預(yù)期的吸光度可以從DNA溶液中的濃度計算得來，DNA溶液透光系數(shù)ε列為0.020µg/ml*cm。

圖1中可以看到通過計算得到的吸光度測量值成一條直線，該線表示在260nm波長時的吸光度測量值。較高吸光度值時，與理論值產(chǎn)生的偏差是由于在光纖分光光度計中散射光干擾的結(jié)果。

Figure 1: 吸光度的測量值與理論值

Figure 2: 典型的DNA測量圖 (56.6µg/mL)

來源：世界精密儀器商貿(mào)（上海）有限公司
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