葉綠體DNA分離
設(shè)備：Hitachi CS-150GXL或CS-120GXL微量超速離心機(jī)，S100AT6 轉(zhuǎn)頭，5PA 密封管（如果用4PC管，可接比例減少各層液量）
溶液配制：
A液：0.35Msorbitol（山梨醇），50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2
B液：5％（w/w）Sodium N—lauroyl Sarcosinate (N—月桂肌氨酸鈉)
方法：CsCl 平衡等密度離心方法 （equilibrium isopycnic）
分離步驟：
1．5ml 葉綠體稀釋加5ml A液
2．CF7D2 或同類離心機(jī) 2500rpm 4℃，15分鐘，50ml ，PP管
3．（2）的沉淀加20—30ml A液“洗”2—3次（用（2）參數(shù)離心2—3次）
4．（3）的沉淀加2ml A液及 pronase (鏈霉蛋白酶)
5．培養(yǎng)：37℃，2小時(shí)。取出后室溫平衡2分鐘
6．混合器混勻（15分鐘）
7．再培養(yǎng)4℃，（2—3）小時(shí)
8．離心：2500rpm，4℃，15分鐘，上清液為粗制DNA液
9．超速離心加樣：5 ml 密封管，樣品（（8）的上清）3.61 ml 加入3.35g CsCl，E.B （ethidium bromide） (澳化乙錠) （10mg/ml）：50ul。溶液CsCl密度為ρ＝1.55g/cm3 ，混勻后密封（用日立STF2自動(dòng)熔封器）
注：以上是單管配置，如配雙管或多管，則所有步驟容量都增加倍數(shù)。
10．離心：日立CS—150GXL或CS—120GXL 離心機(jī)或同類機(jī)型S100AT6轉(zhuǎn)頭，5ml密封管。70,000rpm（約296,000xg，K＝37），離心16小時(shí)，20℃，加速“9”，減速“7”。
注：由于對(duì)同一樣品離心時(shí)間與K近似值成正比，使用其他型號(hào)轉(zhuǎn)頭可參照實(shí)際的K值決定離心時(shí)間
11．結(jié)果：在離心管中部可見(jiàn)明顯的寬約2mm的葉綠體DNA條帶，用講座文章3a篇中的方法取出。
溶液配制：
A液：0.35Msorbitol（山梨醇），50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2
B液：5％（w/w）Sodium N—lauroyl Sarcosinate (N—月桂肌氨酸鈉)
方法：CsCl 平衡等密度離心方法 （equilibrium isopycnic）
分離步驟：
1．5ml 葉綠體稀釋加5ml A液
2．CF7D2 或同類離心機(jī) 2500rpm 4℃，15分鐘，50ml ，PP管
3．（2）的沉淀加20—30ml A液“洗”2—3次（用（2）參數(shù)離心2—3次）
4．（3）的沉淀加2ml A液及 pronase (鏈霉蛋白酶)
5．培養(yǎng)：37℃，2小時(shí)。取出后室溫平衡2分鐘
6．混合器混勻（15分鐘）
7．再培養(yǎng)4℃，（2—3）小時(shí)
8．離心：2500rpm，4℃，15分鐘，上清液為粗制DNA液
9．超速離心加樣：5 ml 密封管，樣品（（8）的上清）3.61 ml 加入3.35g CsCl，E.B （ethidium bromide） (澳化乙錠) （10mg/ml）：50ul。溶液CsCl密度為ρ＝1.55g/cm3 ，混勻后密封（用日立STF2自動(dòng)熔封器）
注：以上是單管配置，如配雙管或多管，則所有步驟容量都增加倍數(shù)。
10．離心：日立CS—150GXL或CS—120GXL 離心機(jī)或同類機(jī)型S100AT6轉(zhuǎn)頭，5ml密封管。70,000rpm（約296,000xg，K＝37），離心16小時(shí)，20℃，加速“9”，減速“7”。
注：由于對(duì)同一樣品離心時(shí)間與K近似值成正比，使用其他型號(hào)轉(zhuǎn)頭可參照實(shí)際的K值決定離心時(shí)間
11．結(jié)果：在離心管中部可見(jiàn)明顯的寬約2mm的葉綠體DNA條帶，用講座文章3a篇中的方法取出。
標(biāo)簽：
葉綠體 DNA 離心 分離
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