設(shè)備：Hitachi CF—7D2離心機(jī)，T5SS或T4SS或T7A轉(zhuǎn)頭50ml PP 離心管CP—MX ，CP—WX超速離心機(jī)，R28S轉(zhuǎn)頭，40ml PA管。（或其他品牌離心機(jī)，同類轉(zhuǎn)頭）

溶液配置：

A液：0.35M Sorbitol，（山梨醇），50mM Tris—HCL (PH8.0) 5mM EDTA-Na₂

(使用前加入2-mercaptoethanol 及 BSA 終濃度0.1％（v/v）)

 

B液：0.35M Sorbitol，50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2

C液：30％（w/w）蔗糖，50mM Tris-Hcl(PH8.0) 25mM EDTA—Na2

D液：52％（w/w）蔗糖，50mM Tris-Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2

 

分離步驟：

1．菠菜液40g+A液200ml，制成勻漿，過濾

2．CF7D2或同類離心機(jī)2500RPM×15分，4℃，50mlPP管，得到約10克沉淀。

3．沉淀用6.5ml B液稀釋后得到9.5-10ml原液

   (這是超離單管容量，如果用較多離心管分離，可按比例增加原液)

4． 日立超離R28S轉(zhuǎn)頭（6×40ml），40mlPA管中底部加18ml D液，中層7ml C液，上部加9.5-10ml 原液。（加到距管口3mm）

   離心：25，000rpm，60分，4℃，加速“7”減速“8”

5．離心后，葉綠體分布在離心管中部形成葉綠體深色條帶（寬13-15mm）

6．檢視：可用光學(xué)顯微鏡（×450）可觀察到綠葉體顆粒。