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                                當前位置 > 首頁 > 技術文章 > Eppendorf 蛋白質核酸自動分析儀操作說明與注意事項

                                Eppendorf 蛋白質核酸自動分析儀操作說明與注意事項

                                瀏覽次數:6915 發(fā)布日期:2010-3-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
                                操作說明:
                                準備:開始測定前只需開啟儀器背后的電源開關即可開始測定,無需預熱。
                                  一、核酸濃度測定(包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo)
                                  1. 例如待測定樣品為dsDNA(eg:PCR產物),按下鍵“7 / dsDNA”
                                  (若待測樣品為ssDNA,eg:反轉錄合成的第一鏈cDNA產物,則相應按下鍵“8 / ssDNA”;
                                  若待測樣品為RNA,則按下鍵“9 / RNA”;
                                  若待測樣品為Oligo(寡聚核苷酸),eg:PCR引物,則相應按下鍵“6 / Oligo”。)
                                  2. 將空白對照置入樣品孔。注意:空白對照是空白液,并非所有情況都是水。(例如用Tris溶液溶解DNA制品,則要用Tris液做空白對照。)
                                  3. 按下鍵“Blank”;
                                  4. 儀器記錄空白對照,設置為0.000A;
                                  5. 將第一個樣品置入樣品孔;
                                  6. 按下“Sample”;
                                  7. 儀器顯示第一個樣品的吸光度值和濃度值,以及其他相關參考比值;
                                  8. 直接放入第二個樣品;
                                  9. 按下“Sample”;
                                  10. 儀器顯示第二個樣品的吸光度值和濃度值,以及其他相關參考比值;
                                  11. 依次測定,每個樣品的測定值將自動存儲在機器中,查看測定結果的方法如下:
                                  (1)按下鍵“./ Function”
                                  (2)選擇“DISPLAY-RESULT”,按Enter鍵,查看每個樣品的測定值記錄(本機可存儲100個樣品的測定值)。
                                  設定樣品的稀釋度
                                  (1)按下鍵“Dilution”;
                                  (2)輸入樣品體積和稀釋液體積,按Enter鍵確認。 
                                 
                                 
                                二、蛋白質濃度的直接測定(280nm測定)
                                  1. 按下鍵“4 / Protein”;
                                  2. 將空白對照置入樣品孔;
                                  3. 按下鍵“Blank”;
                                  4. 儀器記錄空白對照,設置為0.000A;
                                  5. 將第一個樣品置入樣品孔;
                                  6. 按下“Sample”;
                                  7. 儀器顯示第一個樣品的吸光度值和濃度值,以及其他相關參考比值;
                                  8. 依次測定,每個樣品的測定值將自動存儲在機器中,可查看測定結果。
                                  
                                三、蛋白質濃度顯色法的間接測定(Bradford,Lowry, BCA)
                                  1. 按下鍵“1 / Bradbord”or “2 / Lowry”or“BCA”選擇蛋白質顯色反應的方法;
                                  注:Bradford鍵按兩次,每次顯示不同的測定范圍。
                                  2. 設置標準曲線的標準樣品數量、測定次數和濃度范圍。按下鍵“Parameter”用上下鍵 進行選擇和參數調整。
                                  3. 將空白對照置入樣品孔;
                                  4. 按下鍵“Blank”;
                                  5. 儀器記錄空白對照,設置為0.000A;
                                  6. 將第一個標準品或樣品(如需沿用已存儲的標準曲線,可直接測樣品)置入樣品孔;
                                  7. 按下“Sample”或“Standard”;
                                  8. 依次測定標準品或樣品,每個樣品的測定值將自動存儲在機器中,查看測定結果。
                                  
                                四、OD600 細菌生長密度測定
                                  1. 按下鍵“5 /OD 600”;
                                  2. 將空白對照置入樣品孔;
                                  3. 按下鍵“Blank”;
                                  4. 儀器記錄空白對照,設置為0.000A;
                                  5. 將第一個樣品置入樣品孔;
                                  6. 按下“Sample”;
                                  7. 儀器顯示第一個樣品的吸光度值和濃度值;
                                  8. 依次測定,每個樣品的測定值將自動存儲在機器中,查看測定結果。
                                  
                                五、注意事項:
                                  1  為了盡量減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內顆粒的干擾相對較小,結果穩(wěn)定。樣品的濃度不能過低或者過高。
                                  2  混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;
                                  3  混合液中不能有氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;
                                  4  必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則測定濃度結果差異太大;
                                  5  換算系數和樣品濃度單位選擇要一致;
                                  6  不能采用窗口磨損的比色杯;
                                  7  樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積(50ul);
                                  8  通常濃度的樣品可以用10 mm光程長度進行檢測。對于高濃度的樣品,只需將比色皿旋轉90°,使用稍短的2 mm光徑進行檢測。

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