液體閃爍計(jì)數(shù)器與分光光度計(jì)測(cè)定蛋白含量的比較研究
瀏覽次數(shù):7841 發(fā)布日期:2010-2-8
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液體閃爍計(jì)數(shù)器與分光光度計(jì)測(cè)定蛋白含量的比較研究
蛋白質(zhì)含量的比色測(cè)定,是在分光光度計(jì)上完成的。1983年Noble用液體閃爍計(jì)數(shù)器(液閃儀)測(cè)定蛋白含量。l988年強(qiáng)美玉做了分光光度計(jì)測(cè)定濃度范圍內(nèi)的研究。我們用Lowry和Bradford蛋白含量測(cè)定法,對(duì)液閃儀和分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度范圍,準(zhǔn)確度,重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行了比較研究。并用液閃儀測(cè)定了102份人精漿蛋白和31份人血清蛋白樣品。
1 材料和方法
1.1儀器FJ-2107型液閃儀(西安二六二廠)
260型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)(日本島津)。
1.2密封放射源在直徑0.3cm,長(zhǎng)3cm的玻管內(nèi)加入H-雌二醇和甲苯閃爍液,燒封管口。平均放射計(jì)數(shù)為60016±120/6秒(n=15)。
1.3蛋白測(cè)量裝置將3ml顯色后的蛋白測(cè)定液置于測(cè)量套瓶中,放射源微管豎插于被測(cè)液中,測(cè)量套瓶放人閃爍瓶?jī)?nèi)。
1.4液閃儀測(cè)定蛋白含量的原理放射源產(chǎn)生的光子,被有色的蛋白測(cè)定液淬滅,淬滅程度與蛋白濃度成比例。制備放射計(jì)數(shù)對(duì)蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可進(jìn)行蛋白定量測(cè)定。
2 結(jié)果
2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線Lowry(藍(lán)色)和Brdaford(棕色)測(cè)定液,低濃度時(shí),液閎儀和分光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線均為直線。隨著蛋白濃度的增加,標(biāo)準(zhǔn)曲線彎曲,改用放射計(jì)數(shù)對(duì)蛋白濃度的對(duì)數(shù)作圖,標(biāo)準(zhǔn)曲線呈直線。放射計(jì)數(shù)與蛋白濃度,藍(lán)色測(cè)定液成正比,棕色測(cè)定液成反比。
2.2液閃儀與分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度范圍比較。液閃儀比分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度范圍寬12倍(藍(lán)色)和60倍(棕色)。見(jiàn)表1。
2.3液閃儀與分光光度計(jì)測(cè)定準(zhǔn)確度比較標(biāo)準(zhǔn)蛋白液顯色后用液閃儀和分光光度計(jì)測(cè)1o次,其均值與標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度比較。見(jiàn)表2。
2.4液閃儀與分光光度計(jì)測(cè)定重復(fù)性比較低和高濃度蛋白液顯色后用液閃儀和分光光度計(jì)測(cè)定,以批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV)比較。見(jiàn)表3。
2.5液閑儀與分光光度計(jì)測(cè)定穩(wěn)定性比較標(biāo)準(zhǔn)蛋白液顯色后于不同時(shí)間內(nèi)用液閃儀和分光光度計(jì)測(cè)定放射計(jì)數(shù)和吸光度。低濃度,8小時(shí)內(nèi)無(wú)顯著性差異(>0.05);高濃度24小時(shí)內(nèi)無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
2.6液閃儀與分光光度計(jì)測(cè)人精漿蛋白含量比較102份人精漿蛋白(I—owry)~31份人血清蛋清(Bradford法)顯色,液閃儀和分光光度計(jì)測(cè)定的蛋白含量值相關(guān)良好(r=0.974),配對(duì)t檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異(P>O.05),見(jiàn)表5。
3 討論
我們的結(jié)果顯示,液閃儀測(cè)定蛋白的濃度范圍比分光光度計(jì)寬l2~60倍,測(cè)定的重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度可與分光光度計(jì)媲美。我們改進(jìn)Noble法:①改測(cè)定裝置使測(cè)定液由16ml減到3ml;③改用能量低、價(jià)格低,效果好的。H放射源;③對(duì)高濃度曲線進(jìn)行了對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換,實(shí)現(xiàn)了高濃度蛋白樣品的準(zhǔn)確測(cè)定。我們利用現(xiàn)代液閃儀先進(jìn)的樣品和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),使測(cè)定簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、自動(dòng)化,同時(shí)叉拓寬了液閃儀的用途。