食品安全法的實(shí)施加強(qiáng)了食品企業(yè)對(duì)于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè),尤其是乳品,奶制品等食品及畜禽飼料中三聚氰胺的定量分析,有了更為嚴(yán)格的要求。
乳品,奶制品等食品及畜禽飼料中三聚氰胺的定量分析可以使用高效液相色譜法,液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS/MS)或氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS)三種主要方式。無(wú)論使用哪個(gè)方法,樣品預(yù)處理是第一而且是最關(guān)鍵的步驟。樣品預(yù)處理保障了三聚氰胺和產(chǎn)品的有效分離,不讓其他雜質(zhì)干擾檢測(cè)的真實(shí)效果,從而才能獲得真實(shí)可靠的含量數(shù)據(jù)。
三聚氰胺首先從食品及畜禽飼料中用有機(jī)溶劑萃取,食品種類(lèi)不同,萃取方法稍微有些不同,有機(jī)溶劑萃取后必須應(yīng)用固相萃取柱。在應(yīng)用高效液相色譜法做三聚氰胺的定量分析時(shí),固相萃取柱的功能是清掃雜質(zhì),濃縮回收三聚氰胺,如此硅膠基質(zhì)的C8+SCX 或SCX固相萃取柱是首選。另一方面,在應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS/MS)或氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS) 做三聚氰胺的定量分析時(shí),清掃雜質(zhì),消除介質(zhì)效應(yīng)是固相萃取柱最重要的任務(wù),這時(shí)PSA或SCX固相萃取柱是首選。
最簡(jiǎn)單的LC-MS/MS分析方法是:
乳品,奶制品等食品及畜禽飼料用有機(jī)溶劑例如乙腈萃取后,0.5mL 萃取液穿過(guò)一根PSA (500mg/3cc) 固相萃取柱(先用5mL 乙腈淋洗;淋洗液扔掉),用2ml乙腈淋洗,收集全部流出液,用1%甲酸酸化定容。樣品直接用LC-MS/MS分析。
三聚氰胺的LC-MS/MS MRM圖如下:
LC-MS/MS測(cè)試條件:
色譜柱:InnovationTM WCX 3um 15cm x 2.1mm
流動(dòng)相A:乙腈(0.1%甲酸); 流動(dòng)相B: 水(0.1%甲酸); 流速: 300 uL/min 注射量: 10uL;
梯度:55% A + 45% B (等梯度)
儀器: Perkin-Elmer 200 series HPLC
ABI API 4000 tandem mass spectrometer
Leap Technologies Autosampler
測(cè)試樣品:100ng/mL 三聚氰胺
MRM轉(zhuǎn)換(ESI正離子模式): 127.2 → 85.20 (DP: 42; CE: 28; CXP: 5)
127.2 → 68.10 (DP: 42; CE: 42; CXP: 11)
127.2 → 110.30 (DP: 42; CE: 26; CXP : 8)
三聚氰胺在InnovationTM PFPP LC-MS/MS分析柱上的保留是親水正相色譜模式(hydrophilic Interaction chromatography) 。乙腈是弱溶劑, 水是強(qiáng)溶劑。如果需要延長(zhǎng)保留時(shí)間,只需增加乙腈的比率。三聚氰胺在InnovationTM PFPP LC-MS/MS分析柱上峰形很好,沒(méi)有遺留效應(yīng),質(zhì)譜測(cè)試靈敏度高。每個(gè)萃取樣品測(cè)試時(shí)間4分鐘(5cm長(zhǎng)PFPP LC-MS/MS分析柱1分鐘,沒(méi)有雜峰干擾。使用InnovationTM PSA或SCX固相萃取柱徹底消除定量分析中的介質(zhì)效應(yīng)(Matrix effect) 后,用同一流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線對(duì)不同品牌,不同產(chǎn)地,不同成分乳品和奶制品中三聚氰胺檢測(cè)精確,快速,便宜,可信。GLP認(rèn)證證明三聚氰胺回收率85 -105%, CV <10%。因?yàn)檩腿悠凡灰獫饪s干燥, LC-MS/MS分析1-2分鐘,每天可以做400 - 600個(gè)樣品。