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發(fā)酵工藝的控制

瀏覽次數(shù):9491 發(fā)布日期:2009-3-30  來源:生物技術(shù)

     發(fā)酵過程中,為了能對生產(chǎn)過程進行必要的控制,需要對有關(guān)工藝參數(shù)進行定期取樣測定或進行連續(xù)測量。

     反映發(fā)酵過程變化的參數(shù)可以分為兩類:一類是可以直接采用特定的傳感器檢測的參數(shù)。它們包括反映物理環(huán)境和化學環(huán)境變化的參數(shù),如溫度、壓力、攪拌功率、轉(zhuǎn)速、泡沫、發(fā)酵液粘度、濁度、pH、離子濃度、溶解氧、基質(zhì)濃度等,稱為直接參數(shù)。另一類是至今尚難于用傳感器來檢測的參數(shù),包括細胞生長速率、產(chǎn)物合成速率和呼吸嫡等。這些參數(shù)需要根據(jù)一些直接檢測出來的參數(shù),借助于電腦計算和特定的數(shù)學模型才能得到。因此這類參數(shù)被稱為間接參數(shù)。上述參數(shù)中,對發(fā)酵過程影響較大的有溫度、pH、溶解氧濃度等。

1、溫度


    溫度對發(fā)酵過程的影響是多方面的,它會影響各種酶反應(yīng)的速率,改變菌體代謝產(chǎn)物的合成方向,影響微生物的代謝調(diào)控機制。除這些直接影響外,溫度還對發(fā)酵液的理化性質(zhì)產(chǎn)生影響,如發(fā)酵液的粘度、基質(zhì)和氧在發(fā)酵液中的溶解度和傳遞速率、某些基質(zhì)的分解和吸收速率等,進而影響發(fā)酵的動力學特性和產(chǎn)物的生物合成。
   

     最適發(fā)酵溫度是既適合菌體的生長,又適合代謝產(chǎn)物合成的溫度,它隨菌種、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件和菌體生長階段不同而改變。理論上,整個發(fā)酵過程中不應(yīng)只選一個培養(yǎng)溫度,而應(yīng)根據(jù)發(fā)酵的不同階段,選擇不同的培養(yǎng)溫度。在生長階段,應(yīng)選擇最適生長溫度,在產(chǎn)物分泌階段,應(yīng)選擇最適生產(chǎn)溫度。但實際生產(chǎn)中,由于發(fā)酵液的體積很大,升降溫度都比較困難,所以在整個發(fā)酵過程中,往往采用一個比較適合的培養(yǎng)溫度,使得到的產(chǎn)物產(chǎn)量最高,或者在可能的條件下進行適當?shù)恼{(diào)整。發(fā)酵溫度可通過溫度計或自動記錄儀表進行檢測,通過向發(fā)酵罐的夾套或蛇形管中通人冷水、熱水或蒸汽進行調(diào)節(jié)。工業(yè)生產(chǎn)上,所用的大發(fā)酵罐在發(fā)酵過程中一般不需要加熱,因發(fā)酵中釋放了大量的發(fā)酵熱,在這種情況下通常還需要加以冷卻,利用自動控制或手動調(diào)整的閥門,將冷卻水通人夾套或蛇形管中,通過熱交換來降溫,保持恒溫發(fā)酵。

2、pH值


    pH值對微生物的生長繁殖和產(chǎn)物合成的影響有以下幾個方面:
①影響酶的活性,當pH值抑制菌體中某些酶的活性時,會阻礙菌體的新陳代謝;
②影響微生物細胞膜所帶電荷的狀態(tài),改變細胞膜的通透性,影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及代謝產(chǎn)物的排泄;
③影響培養(yǎng)基中某些組分和中間代謝產(chǎn)物的離解,從而影響微生物對這些物質(zhì)的利用;
④PH值不同,往往引起菌體代謝過程的不同,使代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。
    另外,pH值還會影響某些霉菌的形態(tài)。
    發(fā)酵過程中,pH值的變化取決于所用的菌種、培養(yǎng)基的成分和培養(yǎng)條件。培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)的代謝,是引起pH值變化的重要原因,發(fā)酵液的pH值變化乃是菌體產(chǎn)酸和產(chǎn)堿的代謝反應(yīng)的綜合結(jié)果。每一類微生物都有其最適的和能耐受的pH值范圍,大多數(shù)細菌生長的最適pH值為6.3~7.5,霉菌和酵母菌為3~6,放線菌為7~8。而且微生物生長階段和產(chǎn)物合成階段的最適pH值往往不一樣,需要根據(jù)實驗結(jié)果來確定。

     為了確保發(fā)酵的順利進行,必須使其各個階段經(jīng)常處于最適pH值范圍之內(nèi),這就需要在發(fā)酵過程中不斷地調(diào)節(jié)和控制pH值的變化。首先需要考慮和試驗發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)配方,使它們有個適當?shù)呐浔,使發(fā)酵過程中的pH值變化在合適的范圍內(nèi)。如果達不到要求,還可在發(fā)酵過程中補加酸或堿。過去是直接加人酸(如H2SO4)或堿(如 NaOH)來控制,現(xiàn)在常用的是以生理酸性物質(zhì)(NH) 4SO4和生理堿性物質(zhì)氨水來控制,它們不僅可以調(diào)節(jié)pH值,還可以補充氮源。當發(fā)酵液的pH值和氨氮含量都偏低時,補加氨水,就可達到調(diào)節(jié)pH和補充氨氮的目的;反之,pH值較高,氨氮含量又低時,就補加(NH) 4SO4。此外,用補料的方式來調(diào)節(jié)pH值也比較有效。這種方法,既可以達到穩(wěn)定pH值的目的,又可以不斷補充營養(yǎng)物質(zhì)。最成功的例子就是青霉素發(fā)酵的補料工藝,利用控制葡萄糖的補加速率來控制pH值的變化,其青霉素產(chǎn)量比用恒定的加糖速率和加酸或堿來控制pH值的產(chǎn)量高25%。目前已試制成功適合于發(fā)酵過程監(jiān)測pH值的電極,能連續(xù)測定并記錄pH值的變化,將信號輸人pH值控制器來指令加糖、加酸或加堿,使發(fā)酵液的pH值控制在預(yù)定的數(shù)值。

3、溶解氧濃度


    對于好氧發(fā)酵,溶解氧濃度是最重要的參數(shù)之一。微生物深層培養(yǎng)時,需要適量的溶解氧以維持其呼吸代謝和某些產(chǎn)物的合成,氧的不足會造成代謝異常,產(chǎn)量降低。微生物發(fā)酵的最適氧濃度與臨界氧濃度是不同的。前者是指溶解氧濃度對生長或合成有一最適的濃度范圍,后者一般指不影響菌體呼吸所允許的最低氧濃度。為了避免生物合成處在氧限制的條件下,需要考察每一發(fā)酵過程的臨界氧濃度和最適氧濃度,并使其保持在最適氧濃度范圍。

     現(xiàn)在已可采用復(fù)膜氧電極來檢測發(fā)酵液中的溶解氧濃度。要維持一定的溶氧水平,需從供氧和需氧兩方面著手。在供氧方面,主要是設(shè)法提高氧傳遞的推動力和氧傳遞系數(shù),可以通過調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速或通氣速率來控制。同時要有適當?shù)墓に嚄l件來控制需氧量,使菌體的生長和產(chǎn)物形成對氧的需求量不超過設(shè)備的供氧能力。已知發(fā)酵液的需氧量,受菌體濃度、基質(zhì)的種類和濃度以及培養(yǎng)條件等因素的影響,其中以菌濃的影響最為明顯。發(fā)酵液的攝氧率隨菌濃增大而增大,但氧的傳遞速率隨菌濃的對數(shù)關(guān)系減少。因此可以控制菌的比生長速率比臨界值略高一點,達到最適菌體濃度。這樣既能保證產(chǎn)物的比生產(chǎn)速率維持在最大值,又不會使需氧大于供氧。這可以通過控制基質(zhì)的濃度來實現(xiàn),如控制補糖速率。除控制補料速度外,在工業(yè)上,還可采用調(diào)節(jié)溫度(降低培養(yǎng)溫度可提高溶氧濃度)。液化培養(yǎng)基、中間補水。添加表面活性劑等工藝措施,來改善溶氧水平。 
   

     發(fā)酵過程中各參數(shù)的控制很重要,目前發(fā)酵工藝控制的方向是轉(zhuǎn)向自動化控制,因而希望能開發(fā)出更多更有效的傳感器用于過程參數(shù)的檢測。此外,對于發(fā)酵終點的判斷也同樣重要。生產(chǎn)不能只單純追求高生產(chǎn)力,而不顧及產(chǎn)品的成本,必須把二者結(jié)合起來。合理的放罐時間是由實驗來確定的,就是根據(jù)不同的發(fā)酵時間所得的產(chǎn)物產(chǎn)量計算出發(fā)酵罐的生產(chǎn)力和產(chǎn)品成本,采用生產(chǎn)力高而成本又低的時間,作為放罐時間。確定放罐的指標有:產(chǎn)物的產(chǎn)量、過濾速度。氨基氮的含量、菌絲形態(tài)、pH值。發(fā)酵液的外觀和粘度等。發(fā)酵終點的確定,需要綜合考慮這些因素。


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