常見實(shí)驗(yàn)用溶液的配制方法
1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20℃。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。
8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽�；蚍Q取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。
10mg/mlRnase（無DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過程中要戴手套）
5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。
10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃。
100×Denhardt試劑（Denhardt’s regent）
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成分及終濃度 |
配制100ml溶液各成分的用量 |
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2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（組分V） 水 |
2g 2g 2g 加水至總體積為100ml |
依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。
10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）
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成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分的用量 |
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0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選） 0.5mg/ml BSA（組分V）（可選） 水 |
5ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液 1ml 1mol/L 貯液 200ul 100 mmol/L 貯液 50ul 1 mmol/L 貯液 0.5ml 10 mg/mL 貯液 2.25ml |
將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃ 。
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80℃可貯存至少6個(gè)月。
10mmol/L dNTP混合液
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80℃可貯存至少6個(gè)月。
10mmol/L dNTP混合液
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成分及終濃度 |
配制20ul溶液各成分的用量 |
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10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 |
2ul 100 mmol/L dATP 貯液 2ul 100 mmol/L dCTP 貯液 2ul 100 mmol/L dGTP 貯液 2ul 100 mmol/L dTTP 貯液 12ul |
20％PEG 8000/2.5M NaCl
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成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分的用量 |
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質(zhì)量濃度為20％聚乙二醇 2.5mol/L 氯化鈉 水 |
20g 50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉 補(bǔ)足100ml |
加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。
20×SSC
20×SSC
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成分及終濃度 |
配制1L溶液各成分的用量 |
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300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水） 3mol/L 氯化鈉 水 |
88.2g 175.3g 補(bǔ)足1L |
溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。
DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接購(gòu)買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。
磷酸緩沖液（phosphate buffer）
按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4•H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接購(gòu)買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。
磷酸緩沖液（phosphate buffer）
按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4•H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。
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1mol/L 磷酸二氫鈉（ml） |
1mol/L 磷酸氫二鈉（ml） |
最終pH值 |
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877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 |
123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 |
6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 |
TE（用于懸浮和貯存DNA）
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成分及終濃度 |
配制100ml溶液各成分的用量 |
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10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水 |
1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml |
Tris緩沖液（Tris-HCl buffer）
將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25℃下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。
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濃鹽酸的體積（ml） |
pH |
|
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 |
9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 |
二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液 電泳緩沖液 50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液
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成分及終濃度 |
配制1L溶液各成分的用量 |
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2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 |
242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L |
5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液
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成分及終濃度 |
配制1L溶液各成分的用量 |
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445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水 |
54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 補(bǔ)足1L |
染料
1％溴酚藍(lán)（bromophenol blue）
加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide）
小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。
凝膠上樣液（gel loading solutions）
6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）
|
成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分用量 |
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0.3 N 氫氧化鈉 6 mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型） 0.15％溴甲酚綠 0.25％二甲苯青FF 水 |
300ul 10N 氫氧化鈉 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 補(bǔ)足到10ml |
6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）
|
成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分用量 |
|
0.15％溴酚藍(lán) 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型） 水 |
1.5ml 1％溴酚藍(lán) 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 補(bǔ)足到10ml |
6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）
|
成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分用量 |
|
0.25％溴酚藍(lán) 0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型） 水 |
2.5ml 1％溴酚藍(lán) 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 補(bǔ)足到10ml |
6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）
|
成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分用量 |
|
0.15％溴酚藍(lán) 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油 水 |
1.5ml 1％溴酚藍(lán) 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml |
6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）
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成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分用量 |
|
0.15％溴酚藍(lán) 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖 水 |
1.5ml 1％溴酚藍(lán) 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 補(bǔ)足到10ml |
10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）
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成分及終濃度 |
配制10ml溶液各成分用量 |
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0.2％溴酚藍(lán) 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油 水 |
20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 補(bǔ)足到10ml |
三.常用培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
將下列組分溶解在0.9L水中：
|
蛋白胨 |
10g |
|
酵母提取物 |
5g |
|
氯化鈉 |
10g |
如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
SOB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
SOB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
|
蛋白胨 |
20g |
|
酵母提取物 |
5g |
|
氯化鈉 |
0.5g |
|
1 mol/L 氯化鉀 |
2.5ml |
用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。
SOC培養(yǎng)基
成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌）。
TB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
|
蛋白胨 |
12g |
|
酵母提取物 |
24g |
|
甘油 |
4ml |
各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌）。
2×YT培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
2×YT培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
|
蛋白胨 |
16g |
|
酵母提取物 |
10g |
|
氯化鈉 |
4ml |
如果需要用1N NaOH（～1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
YPD培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
YPD培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
|
蛋白胨 |
20g |
|
酵母提取物 |
10g |
|
葡萄糖 |
20g |
用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。
四.常用抗生素
氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
鏈霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
四環(huán)素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
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