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生物芯片(DNA微陣列)熒光掃描儀中的激光共聚焦掃描技術(shù)

瀏覽次數(shù):8079 發(fā)布日期:2008-5-2  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
  所有的微陣列上的熒光須經(jīng)熒光掃描裝置來(lái)分析其上的熒光強(qiáng)度和分布,在這些裝置中,激光共聚焦掃描儀具有優(yōu)越的性能,能獲取高質(zhì)量的圖像和數(shù)據(jù),本文將分別介紹微陣列的相關(guān)特性和各種類型的微陣列掃描儀,激光共聚焦掃描儀的設(shè)計(jì)和關(guān)鍵特性,另外還將介紹一種已商品化的激光共聚焦熒光掃描裝置。

  微陣列是由分子整齊排列于固相表面,這些分子與熒光分子結(jié)合,測(cè)定熒光分子的強(qiáng)度后可推知結(jié)合分子的濃度。固相部分主要有經(jīng)過(guò)表面化學(xué)處理的玻璃片如22mmχ75mm的載玻片。在微陣列上包被的分子常常能與多種熒光探針通過(guò)化學(xué)鍵相互作用而聯(lián)結(jié),通常情況下能聯(lián)結(jié)兩種熒光分子,例如在檢測(cè)不同樣品的基因表達(dá)的區(qū)別時(shí),可將其中一樣品(如正常組織)標(biāo)記上發(fā)綠光的熒光分子,將另一種樣品如腫瘤組織或發(fā)病組織標(biāo)記上另一種發(fā)紅光的熒光分子,用兩種波長(zhǎng)的激光激發(fā)微陣列上的樣品,通過(guò)比較兩種熒光在微陣列上某點(diǎn)的比例得知某類基因在兩種組織中的差異。

  微陣列上有樣品組成的點(diǎn)陣,除了點(diǎn)之外,余下的是背景。如果玻璃片未經(jīng)過(guò)表面化學(xué)處理,樣品在玻片上結(jié)合不牢固,且容易擴(kuò)散,造成背景高。若玻璃片經(jīng)過(guò)表面化學(xué)處理后,點(diǎn)樣的樣品在微陣列上結(jié)合牢固,點(diǎn)的直徑小,不擴(kuò)散,從而點(diǎn)的密度增加,在進(jìn)行熒光數(shù)據(jù)分析時(shí),儀器將點(diǎn)上的熒光強(qiáng)度與點(diǎn)周圍的背景強(qiáng)度相比較,如果背景中含有與熒光波段相一致的物質(zhì),則背景強(qiáng)度增高,樣品的熒光信號(hào)將減弱,干擾信號(hào)的讀取。

  點(diǎn)陣上的點(diǎn)直徑范圍為25mm-500mm,通常目前能達(dá)到的直徑為100mm±50,科學(xué)家們正在努力減小直徑。因?yàn)辄c(diǎn)直徑的變化對(duì)掃描結(jié)果的讀取產(chǎn)生影響,如果點(diǎn)的直徑大,熒光分子擴(kuò)散的范圍也大,則觀察到的熒光強(qiáng)度相對(duì)較弱。

  若在玻片上有灰塵或其它雜質(zhì)如衣物纖維、皮屑、指紋等,掃描結(jié)果將受到影響。微陣列上的點(diǎn)干燥后形成很薄的層,使得激光共聚焦掃描成為可能,精心地調(diào)整掃描儀的焦距,可避免檢測(cè)出不需要的背景雜質(zhì),包括微陣列上的灰塵、玻璃中自帶的熒光雜質(zhì)產(chǎn)生的干擾信號(hào)均可通過(guò)激光共聚焦的方式將其減少到最低程度。因?yàn)殡s交因素影響,在微陣列上點(diǎn)與點(diǎn)之間的熒光強(qiáng)度差別很大。對(duì)微陣列掃描儀的要求要能夠有較寬范圍的靈敏度,通常來(lái)說(shuō),靈敏度調(diào)整范圍為10000:1。

  當(dāng)熒光化合物或染料受到激光激發(fā)后將釋放出熒光,在某一波長(zhǎng)下有一最高釋放強(qiáng)度。各種熒光化合物有各自特定的激發(fā)吸收值。如圖1是FITC的波長(zhǎng)對(duì)熒光激發(fā)強(qiáng)度曲線。從曲線圖可見(jiàn),在494納米波長(zhǎng)下,有一激發(fā)高峰,在518納米下有一釋放高峰,釋放與激發(fā)高峰波長(zhǎng)相差24納米,這一現(xiàn)象在微陣列使用的染料中較普遍。兩高峰波長(zhǎng)的差值在專業(yè)上稱之為Strokes shift, 初看曲線圖人們可能會(huì)以為:FITC在510納米的波長(zhǎng)激發(fā)下,在475-510納米范圍內(nèi)將釋放部分熒光,其實(shí)并不盡然;釋放波長(zhǎng)一般情況下大于激發(fā)波長(zhǎng),在圖中的激發(fā)曲線不是與釋放曲線同時(shí)繪制的,將它們放在同一坐標(biāo)圖中是為了便于觀看,其實(shí)它們是兩套不同的數(shù)據(jù)。激發(fā)曲線的繪制過(guò)程如下:在單一長(zhǎng)波長(zhǎng)下,變換激發(fā)波長(zhǎng)在不同波長(zhǎng)下測(cè)定熒光釋放強(qiáng)度,釋放熒光曲線的繪制過(guò)程則是在最長(zhǎng)激發(fā)波長(zhǎng)下開(kāi)始增加波長(zhǎng),測(cè)定在不同波長(zhǎng)下的熒光釋放強(qiáng)度。微陣列掃描儀設(shè)計(jì)者通過(guò)閱讀和分析某中熒光染料的激發(fā)曲線和釋放曲線來(lái)確定適合某種染料的復(fù)合掃描激發(fā)波長(zhǎng),該波長(zhǎng)的激發(fā)效率至少要達(dá)到50-70%的水平。激發(fā)波長(zhǎng)要避免太接近釋放高峰對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng),否則熒光信號(hào)受到干擾。所以應(yīng)在峰值的左邊選擇一激發(fā)波長(zhǎng)。如對(duì)FITC來(lái)說(shuō),建議的激發(fā)波長(zhǎng)在470-495nm.熒光釋放強(qiáng)度在某一范圍內(nèi),與激發(fā)光的強(qiáng)度成正比,當(dāng)熒光釋放達(dá)到最高峰后,增加激發(fā)光強(qiáng)度卻不能提高釋放強(qiáng)度,因?yàn)闊晒忉尫乓呀?jīng)達(dá)到飽和或光子將染料破壞淬滅。微陣列上各點(diǎn)的熒光分子受到激發(fā)后,從各個(gè)方向釋放熒光光子,散射成球狀,所以掃描儀須將這些散射的光子采集到,由于掃描儀的使用的是很低的釋放光,幾何球狀是設(shè)計(jì)掃描設(shè)備的主要根據(jù)。


  微陣列掃描儀可有多種設(shè)計(jì)類型,但任何類型的微陣列掃描儀都有以下基本功能:

  激發(fā)光

  激發(fā)光的產(chǎn)生源有多種,如激光、氬燈、LEDs或鎢絲燈。激發(fā)光的波長(zhǎng)要避免將釋放光的波長(zhǎng)覆蓋或重疊。對(duì)于LEDs或鎢絲燈需用濾光器來(lái)選擇某種特定波長(zhǎng)的光。激光的波長(zhǎng)單一不需要濾光器來(lái)選擇某種特定波長(zhǎng)的光。燈泡光源可產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的激發(fā)光,通過(guò)多個(gè)濾光器可選擇多種特定的波長(zhǎng)以滿足激發(fā)不同熒光的需要。激發(fā)光應(yīng)直接射向微陣列上的待測(cè)樣品,通過(guò)大量一次照明的方式,待測(cè)樣品的大部分區(qū)域同時(shí)受到激發(fā),這種方式在CCD數(shù)碼相機(jī)中較常見(jiàn),該方式的缺陷是待測(cè)樣品的受到得激發(fā)光不夠均勻一致。這點(diǎn)是儀器設(shè)計(jì)者須考慮到的重要因數(shù)之一。另一種方式是:激發(fā)光聚焦于樣品的很小部分,采用特定的光線采集和定位,聚焦點(diǎn)上的激發(fā)光光線密度較高,大約為10000watt/cm2。激發(fā)波長(zhǎng)的選擇是依據(jù)染料的激發(fā)曲線和釋放曲線的峰值來(lái)確定的,在染料激發(fā)峰值的左邊且激發(fā)效率較高的范圍內(nèi),在某種染料水平下,激發(fā)效率越低,要達(dá)到某種光強(qiáng),則需要向樣品上發(fā)射的光越多。過(guò)多的發(fā)射光將通過(guò)光漂白作用破壞樣品和污染干擾釋放光的信號(hào)。

  釋放光采集

  熒光由目鏡的鏡頭來(lái)采集,該鏡頭聚焦于樣品上并將一定區(qū)域內(nèi)的光線收集到裝置。收集的角度區(qū)域的大小非常關(guān)鍵,熒光釋放是球形的,目鏡對(duì)熒光的采集范圍是決定儀器的采集效率關(guān)鍵指標(biāo)之一。目鏡采集光的角度由數(shù)值孔徑來(lái)表示,圖2表示了數(shù)值孔徑與光采集效率之間的變化關(guān)系。當(dāng)數(shù)值孔徑為1.0時(shí),目鏡將收集到整個(gè)半球的光,相應(yīng)的光采集效率為50%。在許多激光共聚焦微陣列掃描儀的數(shù)值孔徑在 0.5-0.9, 而CCD-掃描儀的數(shù)值孔徑為0.2-0.5。有其他類型的掃描儀不用目鏡而是使用積分球面鏡來(lái)采集釋放的部分光源,但是部分光線經(jīng)過(guò)多次球面反射而衰減。還有一些無(wú)散光收集裝置,僅僅是將探測(cè)器放在樣品的某一區(qū)域的上方,光線采集的效率受限于樣品被照明處的范圍及探測(cè)器的視角,例如,一個(gè)直徑為25mm的探測(cè)器放在激發(fā)點(diǎn)上方100mm處,其實(shí)際的有效數(shù)值孔徑為0.12。圖2顯示目鏡的不同數(shù)值孔徑與光采集效率的關(guān)系。

空間定位
  是指對(duì)樣品上的某一小區(qū)域上的熒光信號(hào)進(jìn)行熒光強(qiáng)度計(jì)算,微陣列上的各點(diǎn)樣品被分割為許多微小的像素,在進(jìn)行熒光信號(hào)定量時(shí),空間分辨率必須高于個(gè)點(diǎn)的大小,如微陣列上各點(diǎn)的直徑為100mm,則像素的大小為5-20mm。空間定位可通過(guò)多元素探測(cè)器,如CCD或機(jī)械掃描裝置。許多相機(jī)設(shè)置為大范圍照明,探測(cè)器直接提供由許多像素組成的圖象,該方法的缺陷是CCD提供的目鏡數(shù)值口徑較小,后方照明及維持系統(tǒng)冷卻設(shè)備價(jià)值昂貴,由于光散射會(huì)導(dǎo)致像素之間交叉重疊造成信號(hào)不夠清晰。機(jī)械掃描過(guò)程包括以下幾個(gè)步驟:將激發(fā)光束聚焦于某一大小同像素差不多的點(diǎn)上,用單一元素的探測(cè)器采集那一小點(diǎn)上的釋放光。要將整個(gè)樣品掃描完全,則需移動(dòng)樣品或用一微小的反光鏡使激光束移動(dòng)掃描樣品。雖然掃描裝置增加了機(jī)械裝置的復(fù)雜程度,但比起CCD相機(jī)來(lái),機(jī)械掃描可達(dá)到的數(shù)值孔徑更高,有更好的空間選擇性,探測(cè)器也較便宜些。在低強(qiáng)度的光源下,高光線采集率是至關(guān)重要的。

  激發(fā)/釋放分辨

  微陣列上各點(diǎn)的熒光釋放強(qiáng)度通常要比激發(fā)光強(qiáng)度弱幾個(gè)數(shù)量級(jí),要從激發(fā)光中檢測(cè)出微弱的熒光信號(hào),就需要對(duì)這兩種類型的光進(jìn)行分離,由于光束中的光波長(zhǎng)不相同,可利用光波分離將不同的光分開(kāi)。許多裝有目鏡的掃描儀采用的是表面照明方式,激發(fā)光束與釋放光束從樣品到目鏡經(jīng)過(guò)同樣的路徑只是方向相反。這種途徑使得從樣品上反射和散射的光與熒光束混合在一起,所以需要用光束分離器對(duì)混合光進(jìn)行分離。一種類型的光束過(guò)濾器是色彩二向或多向過(guò)濾器。它將激發(fā)光束反射并把釋放光束以一較長(zhǎng)的波長(zhǎng)傳輸。這種濾光器對(duì)一、二或三種不同的激發(fā)/釋放光都可進(jìn)行較好的分離,但若超過(guò)四種以上的混合光束則分離有困難。另外一種類型的光線分離器稱為幾何光線分離器,如圖3所示,在掃描系統(tǒng)中,目鏡的數(shù)值孔徑為0.6,像素的大小為10mm,從目鏡出來(lái)的激發(fā)光束比釋放光束細(xì),一個(gè)小反光鏡將激光束反射但是讓環(huán)形部分的釋放光束通過(guò),其分離效果與波長(zhǎng)光束分離器相同。從理論上來(lái)說(shuō),光束分離器可以完全將激發(fā)和釋放光束分開(kāi),但實(shí)際上并非如此,通常在探測(cè)器前放濾光片過(guò)濾釋放光束。這些濾光片只允許染料的釋放高峰附近很窄的一段波長(zhǎng)的光通過(guò),而其他波長(zhǎng)的光包括激發(fā)光都被阻擋了。這是微陣列掃描儀必需的的第二道光束分離裝置。有的掃描儀不用光束分離器而是將激發(fā)光束和釋放光束放在不同的軸上。該方法能將釋放光路徑的激發(fā)光發(fā)射回去,但卻難以達(dá)到較高的數(shù)值孔徑,因?yàn)槟跨R離樣品很近,通常小于1毫米,所以激發(fā)光束能進(jìn)入目鏡的角度范圍很小。其他具有區(qū)分不同波長(zhǎng)光束的裝置有棱鏡、光柵等,這些裝置還可產(chǎn)生一些特殊的作用如連續(xù)的光波調(diào)諧功能。然而,在微陣列中,由于要求對(duì)激發(fā)光有高度的敏感性,因而對(duì)釋放光裝置也相應(yīng)要求有很高的精密度。


  檢測(cè)熒光掃描儀的探測(cè)器

  將微弱的熒光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào),在微陣列掃描儀中的光線探測(cè)器有:光電倍增管、CCD點(diǎn)陣探測(cè)器、雪崩光電二極管。各種裝置有其優(yōu)點(diǎn)也有其缺點(diǎn)。不同檢測(cè)范圍的儀器要根據(jù)它們各自的特點(diǎn)來(lái)選擇合適的探測(cè)裝置。光電倍增管在可見(jiàn)光波范圍內(nèi)是最靈敏的探測(cè)器,它屬于單點(diǎn)探測(cè)器并要求掃描系統(tǒng)對(duì)微陣列上的樣品進(jìn)行空間定位,通過(guò)改變電壓可以很方便地改變光電倍增管的靈敏度。光電倍增管的靈敏度在紅外及近紅外波長(zhǎng)范圍內(nèi)降低得很快,所以它們的用途主要限制在可見(jiàn)光波長(zhǎng)范圍內(nèi)。CCD對(duì)微弱信號(hào)的放大功能不及光電倍增管,因而需要額外的放大系統(tǒng)來(lái)將信號(hào)放大才能達(dá)到光電倍增管的靈敏度范圍的上限。其主要的缺點(diǎn)是:CCD探測(cè)器的實(shí)際數(shù)值孔徑難以達(dá)到06-09的范圍,在低亮度背景下,限制微弱信號(hào)被檢測(cè)出來(lái), 另外CCD探測(cè)器不能與共聚焦系統(tǒng)相兼容;但是在高亮度背景下, 因?yàn)镃CD探測(cè)器有內(nèi)置式掃描功能,其優(yōu)越性就體現(xiàn)出來(lái)了。

  所有的微陣列掃描儀都有固定和放置微陣列固相基質(zhì)的裝置,我們稱之為掃描儀的載樣盒。載樣盒要有能夠容納下玻片的空間,組成其的材料應(yīng)能經(jīng)受的住上千次取放樣品的刮擦考驗(yàn)。通常微陣列的固體介質(zhì)為顯微載玻片,還有塑料片,但是塑料片不如玻璃片剛硬,容易變形,不易聚焦準(zhǔn)確,所以多數(shù)研究者使用的是顯微載玻片。掃描檢測(cè)時(shí)通常是在室溫下進(jìn)行,此時(shí)玻片上各點(diǎn)樣品已經(jīng)干燥,然而,有些染料如FITC在潮濕的環(huán)境下才能釋放出強(qiáng)烈的熒光,所以研究者們?cè)诖郎y(cè)樣品上滴加適量的緩沖液,然后蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。這就需要載樣盒能夠容納載玻片與蓋玻片疊加之后的厚度,掃描儀在掃描時(shí)聚焦于蓋玻片下的那一層平面進(jìn)行掃描。

  以下要介紹共聚焦掃描微陣列的工作原理,顧名思義,共聚焦掃描儀將視野中的兩個(gè)聚焦點(diǎn)的影象裝配為二維圖象,工作過(guò)程如所示:平行的激光束通過(guò)光束分離器后進(jìn)入目鏡,目鏡采集到部分球狀散射的熒光釋放光并使這些光成為平行的光束,此外還采集被反射的激光,這些激光的強(qiáng)度要比熒光強(qiáng)度大3-7倍。采集回來(lái)的光束再次通過(guò)光束分離器,光束分離器將大部分激光反射回激光源處,并允許大部分熒光束通過(guò)光束分離器,一面平面鏡將熒光束反射到釋放光柵處,光柵選擇很窄范圍波長(zhǎng)的光通過(guò),并將剩余的激光激發(fā)光全部反射回去。共聚焦的工作特點(diǎn)體現(xiàn)在探測(cè)目鏡和開(kāi)了一個(gè)針孔大的孔的光線擋板上,探測(cè)目鏡將平行光聚集為很小直徑的一束光之后,擋板上的小孔只允許聚焦的光線通過(guò)并將其余的光遮擋住。圖5顯示若發(fā)光點(diǎn)不在目鏡焦點(diǎn)范圍內(nèi),則光線將被探測(cè)目鏡聚集于擋光板前,散射之后大部分光線被遮擋了,只有焦點(diǎn)范圍內(nèi)的光線才能有效地進(jìn)入當(dāng)光板的小孔被探測(cè)器檢測(cè)到。對(duì)焦距范圍的嚴(yán)格限制使得灰塵或近表面的小顆粒均不能成像被探測(cè)到,因而共聚焦掃描儀獲得圖象的信噪比要高于非共聚焦掃描裝置。但另一方面,對(duì)焦距范圍的嚴(yán)格限制要求載玻片擺放非常平穩(wěn),掃描運(yùn)動(dòng)過(guò)程中載樣盒要保持在同一水平面上,偏差要小于焦距的范圍,偏差小于±10mm。這一要求增加了機(jī)械加工的精密度,使得加工工藝更加復(fù)雜,但這是保證獲得最佳圖象質(zhì)量的有效途徑之一。

由于激光共聚焦于載玻片上的一點(diǎn)上,要獲得整張玻片上的各點(diǎn)的熒光信息則要對(duì)玻片各點(diǎn)進(jìn)行掃描成像?赏ㄟ^(guò)移動(dòng)掃描器或移動(dòng)目鏡和載玻片來(lái)實(shí)現(xiàn)上述功能。掃描器移動(dòng)后要求目鏡能采集到熒光釋放光束,這樣的目鏡很復(fù)雜且數(shù)值孔徑不超過(guò)0.3,較為簡(jiǎn)單的并且采集光效率高的辦法是移動(dòng)目鏡或載玻片,但移動(dòng)的物體大勢(shì)必影響掃描速度。不過(guò)在弱光環(huán)境下,圖象讀取速度取決于探測(cè)到的光子的累積量,所以即使掃描速度快而光采集效率低的話圖象讀取信號(hào)也未必快。
  所有的掃描儀都會(huì)面臨同樣的一個(gè)問(wèn)題,即如何將背景降低并提高待測(cè)樣品的信號(hào)。共聚焦技術(shù)的應(yīng)用使得共聚焦掃描儀能比其它類型的掃描儀獲得更高質(zhì)量的圖像信號(hào)。在共聚焦掃描儀中有光束分離器及釋放光柵將熒光信號(hào)分離并傳輸給探測(cè)器,而將激發(fā)光和雜質(zhì)產(chǎn)生的光反射回去并阻擋它們到達(dá)探測(cè)器。探測(cè)器是光電倍增管,其靈敏度高,可探測(cè)到一個(gè)光子的存在,光電倍增管內(nèi)的功率放大器可將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)并放大100萬(wàn)倍,通過(guò)調(diào)整電壓輸出可改變光電倍增管的靈敏度范圍,微陣列上不同樣品的制備過(guò)程導(dǎo)致對(duì)儀器靈敏度要求不同,內(nèi)置式的可調(diào)靈敏度裝置恰好可適應(yīng)這些不同的變換。傳統(tǒng)的硅探測(cè)器如PIN光電二極管,沒(méi)有內(nèi)置放大裝置,在可見(jiàn)光范圍內(nèi)靈敏度很低,因而需要外置的功率放大器,這就增加了雜訊,降低了信噪比。硅探測(cè)器在800-900nm范圍內(nèi)有一波長(zhǎng)應(yīng)答高峰,因此用它們探測(cè)近紅外范圍的染料較為理想。光電倍增管通常在500nm左右范圍內(nèi)有一波長(zhǎng)應(yīng)答高峰,高于650nm后則靈敏度迅速降低。它們適用于大部分可見(jiàn)光范圍的染料。

  微陣列掃描儀靈敏度范圍要求:在微陣列樣品制備過(guò)程中,步驟較多,如PCR反應(yīng)、雜交反應(yīng)條件變化多、試劑存儲(chǔ)條件不同、不同類型的基因表達(dá)等因素的影響,即使適用相同的染料,其亮度也可能相差1000倍,在同一快微陣列上的熒光強(qiáng)度范圍可達(dá)到4000:1的范圍。大部分掃描儀的熒光強(qiáng)度讀取范圍在4000-16000,若不改變儀器的靈敏度范圍,就無(wú)法適應(yīng)各種熒光強(qiáng)度樣品的讀取。調(diào)整儀器靈敏度范圍的方法有兩種:其一是改變激發(fā)光的強(qiáng)度,用激光衰減器可調(diào)整改變激發(fā)光的強(qiáng)度其可調(diào)范圍至少為100:1。其二是改變光電倍增管的靈敏度,通過(guò)變化輸入電壓的大小,光電倍增管的靈敏度改變范圍至少為100:1。兩項(xiàng)調(diào)整方式可相互疊加使得儀器的調(diào)整范圍增加到10000:1,這一范圍對(duì)普通的掃描儀都足夠了。通常人們希望使用的激光強(qiáng)度大而不破壞樣品上的熒光分子,我們已經(jīng)知道,激光強(qiáng)度越大激發(fā)的熒光光子越多,信號(hào)也越清楚和強(qiáng)烈。但是若樣品經(jīng)過(guò)多次掃描后,被破壞的熒光光子將增加,所以要將熒光強(qiáng)度降低以防樣品上的熒光淬滅。

  信號(hào)轉(zhuǎn)換及采樣過(guò)程:由被激發(fā)的熒光染料產(chǎn)生的光學(xué)信號(hào)將通過(guò)一系列過(guò)程轉(zhuǎn)變?yōu)閿?shù)碼信號(hào)。熒光信號(hào)是由一系列隨機(jī)的光子釋放累加而成。若將它們累計(jì)可與某一樣品區(qū)域的染料分子的密度相關(guān)。通常掃描儀對(duì)空間上和時(shí)間上探測(cè)到的熒光光子的數(shù)量都加以累計(jì)并取平均值才能代表某一樣品區(qū)域的染料分子的密度。被掃描的區(qū)域被分為大小相同的像素。激光共聚焦和其它點(diǎn)-照明式掃描儀對(duì)逐個(gè)像素進(jìn)行激發(fā),然后探測(cè)器累加各像素點(diǎn)上熒光釋放分子。將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)并數(shù)值化。各像素的數(shù)碼分辨率可達(dá)到16-比特,當(dāng)掃描圖像正在進(jìn)行時(shí),顯示器要顯示圖像以供掃描者作初步的分析,掃描過(guò)程結(jié)束后可將圖像保存為圖像格式文件如TIFF格式,這種格式的圖像文件時(shí)目前用途較廣的一種圖像文件。

  控制和自動(dòng)化系統(tǒng)是由電腦來(lái)完成的。掃描儀使用者無(wú)須精通掃描儀的光學(xué)和電子學(xué)部分,已商品化的掃描儀已經(jīng)經(jīng)過(guò)大量的測(cè)試和信息反饋并不斷地改進(jìn),使其用戶界面越來(lái)越友好,圖形化的操作界面使得初學(xué)者只需接受簡(jiǎn)單的訓(xùn)練或閱讀操作手冊(cè)就能夠使用儀器?刂栖浖哂性S多自動(dòng)設(shè)置功能,為使用者節(jié)省時(shí)間提高工作效率。如:不同的用戶掃描不同樣品可設(shè)置、保存、再現(xiàn)掃描參數(shù);可自動(dòng)設(shè)定2個(gè)以上的掃描激光波長(zhǎng)并自動(dòng)保存圖像結(jié)果;對(duì)某一掃描波段自動(dòng)調(diào)整靈敏度、激發(fā)光強(qiáng)度、及探測(cè)器探測(cè)范圍等。

  掃描儀各部件功能參數(shù)主要如下:

  激光源的數(shù)目和熒光波段 第一代微陣列掃描儀通常是兩個(gè)或四個(gè)熒光波段及兩個(gè)激光光源,而第二代儀器則含三或四個(gè)激光光源并可選擇10種熒光波段。

  另外,分辨率、靈敏度、掃描速度、掃描視野、掃描圖像定位的準(zhǔn)確程度等指標(biāo)也是設(shè)計(jì)和制造微陣列掃描儀所需考慮的技術(shù)指標(biāo)。微陣列掃描儀之間的比較是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,不應(yīng)僅僅對(duì)單個(gè)性能參數(shù)進(jìn)行比較,通常需要對(duì)掃描樣品進(jìn)行綜合測(cè)試。

  ScanArray共聚焦微陣列掃描儀

  General Scanning ,Inc.公司已經(jīng)建立了ScanArray共聚焦微陣列掃描儀的生產(chǎn)線,目前全世界的許多生物技術(shù)和遺傳基因組分析實(shí)驗(yàn)室都在使用該種儀器進(jìn)行科研工作。

  ScanArray的結(jié)構(gòu)組成是:樣品載體移動(dòng)、光源固定、多個(gè)激光頭的共聚焦掃描儀。數(shù)值孔徑可達(dá)0.75,掃描速度達(dá)20線/秒。

  ScanArray共聚焦微陣列掃描儀優(yōu)越性能表現(xiàn)在:操作簡(jiǎn)單、體積小,數(shù)值孔徑高、掃描速度快,靈敏度和分辨率高。

 目前有兩種型號(hào):ScanArraya3000和ScanArraya5000

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