維洛信提供基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的腺病毒載體構(gòu)建預(yù)包裝服務(wù),根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)short guide RNA (sgRNA) 序列并構(gòu)建入腺病毒載體,進(jìn)而斷裂DNA雙鏈,實(shí)現(xiàn)對基因的精確敲除。
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維洛信使用應(yīng)用最廣的5型腺病毒,現(xiàn)提供重組腺病毒制備服務(wù),應(yīng)用與多種基因操作策略。我們采用新一代AdMax雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染系統(tǒng),重組效率高,避免了細(xì)菌重組的不確定性,生產(chǎn)的高滴度、高純度的病毒顆�?芍苯討�(yīng)用于各類體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)。
-基于CRISPR的基因敲除的AdV載體構(gòu)建與包裝
維洛信提供基于CRISPR/Cas9系統(tǒng)的腺病毒載體構(gòu)建預(yù)包裝服務(wù),根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)short guide RNA (sgRNA) 序列并構(gòu)建入腺病毒載體,進(jìn)而斷裂DNA雙鏈,實(shí)現(xiàn)對基因的精確敲除。
重組腺病毒載體優(yōu)勢:
1. 宿主范圍廣:能夠感染分裂期細(xì)胞與靜止期細(xì)胞;對上皮細(xì)胞有高度嗜性,尤其適用于感染原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞類型
2. 感染效率高:優(yōu)于其他病毒載體和轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的高感染能力,能達(dá)到近100%的效率
3. 包裝容量大:最高可插入7.5 kb的外源片段
4. 表達(dá)水平高:1-2d即開始高水平表達(dá)
5. 安全系數(shù)高:去除病毒蛋白編碼序列,降低細(xì)胞毒性和免疫反應(yīng);雙質(zhì)粒轉(zhuǎn)染系統(tǒng),生物安全性高
6. 無整合風(fēng)險(xiǎn):無插入致突變性
服務(wù)流程:
1. 方案溝通
2. 基因克�。横槍Π谢蛟O(shè)計(jì)sgRNA,并構(gòu)建入腺病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,測序驗(yàn)證
3. 病毒包裝:AdMax雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染(轉(zhuǎn)移質(zhì)粒+病毒包裝質(zhì)粒)入293宿主細(xì)胞, 借助Cre/loxP系統(tǒng)生成重組腺病毒顆粒
4. 收毒:短暫孵育后收獲病毒液
5. 擴(kuò)增與純化:根據(jù)客戶要求進(jìn)行病毒擴(kuò)增;超速離心純化,超濾濃縮
6. 質(zhì)量控制:
- 多重酶切質(zhì)粒鑒定
- qPCR檢測病毒滴度
- 病毒顆粒光密度(OD260)
交付內(nèi)容:
定制腺病毒病毒顆粒
對照病毒(可用于轉(zhuǎn)導(dǎo)測試)
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
維洛信腺病毒平臺:
1. 先進(jìn)AdMax包裝系統(tǒng)與嚴(yán)格制備工藝,力求獲取最優(yōu)滴度、活性、純度與一致性的腺病毒產(chǎn)品
2. 20余種組織特異性啟動子(CMV, mCMV, PGK, CAG等)與多種報(bào)告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)可供選擇,滿足您的不同需求
4. 滴度高:維洛信可提供1010~1011 pfu/mL及以上滴度的病毒,滿足大部分實(shí)驗(yàn)的使用要求
5. 靈活生產(chǎn):我們提供體外應(yīng)用級別與體內(nèi)應(yīng)用級別各種規(guī)格的病毒(小規(guī)格、中規(guī)格、大規(guī)格)的制備服務(wù)
6. 具有競爭力的價(jià)格與貨期
針對不同應(yīng)用方向,我們提供以下腺病毒制備服務(wù):