酵母雙雜交文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)介紹

酵母雙雜交技術(shù)產(chǎn)生以來，主要應(yīng)用在以下幾個方向：
1、檢驗一對功能已知蛋白間的相互作用。
2、 研究一對蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結(jié)構(gòu)域。
3、 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑。
4、 分析新基因的生物學功能，即以功能未知的新基因去篩選文庫。通常依靠報告基因的轉(zhuǎn)錄激活來鑒定蛋白相互作用。將一個基因克隆到"誘餌"載體，并和GAL4蛋白的DNA結(jié)合域(DBD)表達為融合蛋白。將第二個基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到"獵物"載體，同GAL4的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)表達為融合蛋白。當兩個蛋白相互作用時，AD和DBD間距離被拉近，從而激活報告基因的表達。

本服務(wù)項目使用infusion重組系統(tǒng)進行重組，使用專利的cDNA合成方法進行cDNA的合成。  

實驗步驟  
  1.1.RNA提取 
  1.2.mRNA分離 
  1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不經(jīng)過PCR擴增過程，比SMART方法質(zhì)量大大提高） 
  1.4.cDNA長度分級
 1.5.分級后的cDNA與酵母雙雜載體(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等載體，或者客戶指定載體)進行infusion重組。 
  1.6.重組后產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 
  1.7.文庫鋪板檢測與菌液保存 
  1.8.文庫質(zhì)粒提取 
  
產(chǎn)品內(nèi)容 
  我們提供構(gòu)建好的酵母文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養(yǎng)基），文庫甘油菌，隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構(gòu)建報告，酵母雙雜交篩選相關(guān)細胞和質(zhì)粒。 

 
質(zhì)量標準   
 3.1 文庫庫容量：大于1*10^7CFU。
 3.2 平均插入片段：大于1.2Kbp。
 3.3 陽性率：大于95%。  
 
服務(wù)時間 
 20個工作日內(nèi)
 備注1：該酵母文庫可以選擇增加均一化處理步驟，我們使用DSN法均一化方法，可以構(gòu)建出高質(zhì)量的均一化酵母雜交文庫，可以大大減少后續(xù)酵母篩選的工作量和篩選效率等。  

提供的產(chǎn)品
  ♦ 詳細的實驗報告  
  ♦ 酵母雙雜交（酵母單雜交）文庫質(zhì)粒、菌液  
  備注2：如果客戶需要轉(zhuǎn)化酵母，我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液（同clontech）。  
 
服務(wù)周期
 獲得合格的總RNA后25工作日，如需轉(zhuǎn)化酵母延長15個工作日。 
  
材料要求 
  客戶構(gòu)建指定的酵母雙雜交cDNA文庫，由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可：
  細胞樣本：細胞數(shù)量大于1*10^7 
 動物樣本：大于1g 
  物樣本：大于2g 
 總RNA：大于200ug 

咨詢與訂購

感謝您選擇我們的服務(wù)，如果您有任何問題，請聯(lián)系我們，我們將竭誠為您解答和服務(wù)。
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