1.背景介紹
    RNAi技術(shù)是一種新型的基因沉默工具，可簡(jiǎn)單、快速、特異地分析特定基因的細(xì)胞功能。其工作原理如下：在內(nèi)源蛋白復(fù)合物（RISC）的作用下，雙鏈RNA分子可以通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則而降解目標(biāo)靶基因的信使RNA（mRNA），從而達(dá)到沉默靶基因表達(dá)水平的目的。在全基因范圍，篩選與確認(rèn)特定細(xì)胞行為的功能基因已成為藥物化學(xué)、生命科學(xué)研究已經(jīng)應(yīng)用的常規(guī)手段�；�于SiRNA全基因組文庫(kù)的高通量篩選技術(shù)，可平行分析成千上萬(wàn)條基因的功能，大大加快研究進(jìn)程，從而能迅速、全面地鑒定出細(xì)胞過(guò)程或信號(hào)傳導(dǎo)途徑的相關(guān)候選基因，以及疾病相關(guān)的藥物靶基因，保證研究成果更為系統(tǒng)、新穎。
                                                                
2.常規(guī)孔板篩選辦法
    常規(guī)的siRNA篩選是基于384或96微孔板，采用一般轉(zhuǎn)染siRNA的方法或者反式轉(zhuǎn)染方法將siRNA導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行高通量的細(xì)胞功能篩選。其中反式轉(zhuǎn)染法由于操作方便，時(shí)間較短，常被高通量篩選采用。簡(jiǎn)單講，預(yù)先將siRNA文庫(kù)里各條siRNA分別與轉(zhuǎn)染試劑混合，轉(zhuǎn)移到384微孔板中，然后將培養(yǎng)好的細(xì)胞接種到微孔板里，細(xì)胞被轉(zhuǎn)染siRNA。經(jīng)過(guò)48-72小時(shí)的培養(yǎng)，蛋白表達(dá)水平沉默后，通過(guò)高通量的微孔板讀數(shù)儀或高通量的掃描顯微鏡讀出孔板里的細(xì)胞信號(hào)。若這些細(xì)胞信號(hào)與參照細(xì)胞相比發(fā)生了變化，則認(rèn)為相應(yīng)的siRNA與研究的細(xì)胞過(guò)程相關(guān)，從而鑒定出相關(guān)的候選基因。
                                

                                
                                                  傳統(tǒng)siRNA篩選示意圖
                                

    微孔板篩選雖然簡(jiǎn)單明了，使用方便，適合于100-500個(gè)基因范圍的篩選。但是當(dāng)篩選庫(kù)容量增大時(shí)，孔板篩選的成本將大大提高。比如，全基因組2萬(wàn)個(gè)基因，若重復(fù)三次篩選，需做6萬(wàn)次轉(zhuǎn)染、分析，因此使用的siRNA、轉(zhuǎn)染試劑、以及后續(xù)檢測(cè)用的抗體和底物需要量特別大。
                                                                
3.芯片篩選技術(shù)
    除了傳統(tǒng)的孔板篩選服務(wù)外，吉諾瑞針對(duì)大規(guī)模篩選需求，成功開(kāi)發(fā)出先進(jìn)的SAMcell（Self-Assemble  Microcell）細(xì)胞芯片技術(shù)，在玻璃蓋玻片上，細(xì)胞自組裝形成細(xì)胞島點(diǎn)陣，極大地提高了篩選通量。同時(shí)采用反向轉(zhuǎn)染技術(shù)，簡(jiǎn)化了篩選過(guò)程，同時(shí)大大減少篩選中使用的SiRNA和相應(yīng)試劑的用量。
                                

                                
               SAM  cell技術(shù)示意圖:  在芯片上點(diǎn)印siRNA或miRNA，接種細(xì)胞后，細(xì)胞自組裝形成細(xì)胞島點(diǎn)陣，同時(shí)siRNA或miRNA自動(dòng)轉(zhuǎn)染到對(duì)應(yīng)的細(xì)胞小島，最后通過(guò)高內(nèi)涵圖像掃描系統(tǒng)成像，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
                                                                
                                

  細(xì)胞島間無(wú)交叉污染：在20x20mm的蓋玻片上，細(xì)胞在自組裝形成點(diǎn)陣的同時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)GFP的質(zhì)粒，細(xì)胞小島間隔形成熒光點(diǎn)陣，而相鄰的細(xì)胞小島（沒(méi)有轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒）則沒(méi)有熒光信號(hào)。
技術(shù)特點(diǎn)：
    1.  篩選通量極大提高。                                
     2.操作簡(jiǎn)單，只需要像傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)操作一樣加入細(xì)胞，細(xì)胞自組裝自轉(zhuǎn)染，使得大規(guī)模篩選十分方便。                                
     3.驗(yàn)平行性好,穩(wěn)定性提高100倍，所有細(xì)胞小島在同樣的培養(yǎng)環(huán)境，避免384孔板間實(shí)驗(yàn)條件差別。                                
     4.成本是現(xiàn)有篩選技術(shù)的十分之一,  SiRNA、轉(zhuǎn)染試劑及檢測(cè)抗體用量都大大降低。

    SAM cell技術(shù)已經(jīng)大量應(yīng)用于SiRNA基因文庫(kù)及化合物庫(kù)高通量篩選。
                                                                                                
4.篩選設(shè)備
   吉諾瑞擁有高通量液體工作站、高內(nèi)涵成像儀、微孔板讀數(shù)儀、酶標(biāo)儀、高通量細(xì)胞分裝以及清洗儀先進(jìn)的全套高通量篩選設(shè)備

  5.目前吉諾瑞提供如下規(guī)模文庫(kù)篩選
      1)  全基因組siRNA文庫(kù)（約21585genes）                                
        2)  人類全miRNA文庫(kù)及inhibitor（904條）
        3)  細(xì)胞周期調(diào)節(jié)siRNA  文庫(kù)（131genes）
        4)  去泛素化酶siRNA文庫(kù)（127genes）
        5)  磷酸化酶文庫(kù)（257genes）
        6)  細(xì)胞因子受體siRNA文庫(kù)（319genes）
        7)  G蛋白偶聯(lián)受體siRNA文庫(kù)(516genes)                            

北京唯尚立德生物科技有限公司是一家致力于生命科學(xué)領(lǐng)域相關(guān)技術(shù)項(xiàng)目開(kāi)發(fā)的公司。公司核心團(tuán)隊(duì)由海外歸國(guó)學(xué)者和畢業(yè)于國(guó)內(nèi)頂尖學(xué)府的博士組成。目前已建立起一系列完善的技術(shù)平臺(tái)。
    公司具有大規(guī)�？焖俳M裝TALEN的核心技術(shù)，以及完善的慢病毒包裝、細(xì)胞系構(gòu)建、模式生物構(gòu)建、miRNA相關(guān)全套技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，目前主要業(yè)務(wù)為客戶提供快速高品質(zhì)的TALEN靶向基因敲除相關(guān)服務(wù)和miRNA相關(guān)全套技術(shù)服務(wù)。作為國(guó)內(nèi)最早開(kāi)始提供TALEN靶向基因敲除技術(shù)服務(wù)的公司之一，我們?cè)诙潭桃荒曛畠?nèi)已經(jīng)為客戶和合作伙伴提供了1000多對(duì)驗(yàn)證活性的TALEN質(zhì)粒，多例靶向基因敲除的小鼠、基因敲除及敲入的細(xì)胞系以及基因敲除的斑馬魚(yú)等高品質(zhì)服務(wù)案例，多個(gè)合作客戶已經(jīng)成功完成了靶向基因敲除干細(xì)胞系的構(gòu)建以及基因敲除豬的構(gòu)建。
     我們深知時(shí)間與質(zhì)量對(duì)科研工作的重要性，為此我們將在獲悉您的需要后，由我們的專家團(tuán)隊(duì)在第一時(shí)間與您取得聯(lián)系，詳細(xì)了解您的要求，在最短的時(shí)間內(nèi)提出最佳的技術(shù)方案，并隨時(shí)與您保持溝通，隨時(shí)解決項(xiàng)目進(jìn)程中出現(xiàn)的問(wèn)題。
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