Incucyte® Exofluor細胞外囊泡快速標記試劑盒上市

瀏覽次數(shù)：2680　發(fā)布日期：2024-5-27　來源：賽多利斯實驗室

細胞外囊泡(EV, Extracelluar Vesicle)是當今細胞生物學和新診療療法的熱點研究領域。EV根據(jù)直徑大小和生物生成過程分為多種類型，其中大多數(shù)尺寸較小的EV被稱為外泌體(Exosome)。國家發(fā)改委于2022年印發(fā)的《“十四五”生物經(jīng)濟發(fā)展規(guī)劃》將“外泌體治療產(chǎn)品”首次納入國家經(jīng)濟發(fā)展規(guī)劃，2023年在“囊泡”和“外泌體”方向的國自然金額累計近1.5億元，立項近390項，超過前兩年立項數(shù)^[1]。

截止至目前，EV和外泌體在國內外的研究熱潮不減^[2]，在產(chǎn)業(yè)端也受到醫(yī)藥、生物技術、體外診斷產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)的爭相投資。

圖1. PubMed檢索外泌體相關研究論文發(fā)表數(shù)量

圖2. PubMed檢索Extracelluar Vesicle相關研究論文發(fā)表數(shù)量

活細胞攝取實驗EV樣本制備的挑戰(zhàn)

在EV研究的初步階段，往往需要從干細胞等活細胞培養(yǎng)基，或血液、尿液和唾液等體液中分離出足夠量和高純度的EV。傳統(tǒng)的分離技術有沉淀法(P)、超速離心(UF)、體積排阻色譜法(SEC)、免疫親和捕獲(IAC)。這些方法往往耗時耗力，有時因實驗者操作原因導致EV得率和純度都不甚理想。

點擊放大查看

賽多利斯EV分離純化標記新方案

為應對EV分離和純化的挑戰(zhàn)，賽多利斯推出了一種創(chuàng)新的Incucyte® Exofluor細胞外囊泡（綠色）標記試劑盒。這款試劑盒結合了超濾法和膜過濾技術，能夠均一化EV尺寸并適應未來的規(guī)�；a(chǎn)。它提供了一個簡化且快速的操作流程，特別優(yōu)化了針對外泌體囊泡顆粒的分離。接下來讓我們一起來詳細了解一下吧。

Incucyte® Exofluor細胞外囊泡（綠色）快速標記試劑盒

輕松3步的活細胞攝取實驗EV樣品快速制備
Step 1

EV熒光標記30分鐘
將EV熒光染料與各種來源EV和外泌體的懸液混合孵育

Step 2

超濾去除游離熒光染料5分鐘
在賽多利斯Vivaspin® 2 超濾柱中去除游離的EV染料

Step 3

過濾去除非EV雜質
已去除游離的EV染料的EV懸液裝入注射器，通過賽多利斯Minisart® (0.22 μm) 過濾器來同時完成滅菌并去除殘留的EV聚集體

點擊放大查看

圖3. Incucyte® Exofluor細胞外囊泡(綠色)標記試劑盒簡便的操作流程

通過將從以上3步法簡便快速獲得的熒光標記EV和外泌體， Incucyte® 實時活細胞成像分析系統(tǒng)與Cell-by-Cell Analysis 和Basic Analyzer軟件模塊配合使用，為您的EV和外泌體活細胞攝入量化成像研究賦能諸多實驗結果準確性提升和新發(fā)現(xiàn)的洞察便利：

1 可攝入細胞類型廣泛：標記純化的EV和外泌體適用于常用攝取實驗細胞類型

圖4. 賽多利斯EV標記試劑盒標記的EV和外泌體可以在多種常用攝取細胞類型和培養(yǎng)基條件下被細胞正常攝取。用EV標記的A549細胞來源外泌體處理后24小時拍攝圖像顯示，與對照組相比細胞形態(tài)沒有變化。僅染料處理組提示游離染料不會觸發(fā)細胞攝取。賽多利斯Exofluor細胞外囊泡快速標記試劑盒染料通過與EV和外泌體牢固結合，均勻地標記小型 EV(如外泌體)的質膜。與 EV 不可逆結合并且可去除游離染料，雙管齊下地降低了攝取前或攝取期間染料非特異地附著到其他質膜上的風險。

2 兼容不同EV上游處理方法：不同細胞來源和純化方法(UF, SEC, TFF/IEX色譜法)獲得的EV和外泌體經(jīng)本試劑盒處理后都可被正常攝入細胞

圖5. Incucyte® 成像結果顯示A549人肺腺癌細胞系受體細胞攝取了采用Incucyte® Exofor-Green 標記的各種EV（處理后24 小時）。使用超濾和SEC 方法 (HansaBioMed) 提取A549 來源外泌體，并以2 μg/ 孔用量加入到不同細胞系培養(yǎng)孔中進行處理。使用人血漿來源的外泌體(Abcam，超濾提取法)，濃度為 4 μg/ 孔。使用 TFF/IEX 色譜法提取間充質干細胞和 HEK293T 來源的 EV (賽多利斯)，并分別以 1.5 × 10⁷和 8.3 × 10⁷顆粒 / 孔用量加入到不同細胞系培養(yǎng)孔中進行處理。

3 不干擾細胞的“真正”攝入：標記后的EV細胞攝入呈濃度依賴性，不干擾細胞生長，并可證明是通過細胞攝取內吞途徑而非非特異性細胞滲入

圖6. 使用TFF/IEX 色譜法純化來自HEK293T 細胞的EV，并使用Incucyte® Exofluor Green EV 標記試劑盒進行標記，然后添加到A549 受體細胞中。在2天內每2 小時采集一次相差和綠色熒光圖像，并使用Incucyte® Cell-by-Cell 軟件分析模塊進行分析。
1. 將標記的EV 滴定約40 倍（42×10⁷和1×10⁷ 顆粒/ 孔），并使用平均綠色熒光均值強度來評估EV 攝取情況�？梢院芎糜^察到熒光強度顯示出的濃度依賴性變化

2. 明場細胞計數(shù)分析表明（Phase Object Count, 標準化為t=0），在所有測試的不同濃度的標記EV 下，細胞增殖沒有發(fā)生變化
3. 將A549 細胞接種后培養(yǎng)過夜，然后在無外泌體的培養(yǎng)基中用細胞內吞抑制試劑Dynasore（0.01 至100 μM）處理。使用Dynasore 處理后，立即加入用Incucyte® Exofor Green 標記的Hansa A549 來源外泌體（2 μg/ 孔）。細胞攝取外泌體受到抑制的抑制劑濃度梯度依賴性作用（IC50=2.72 μM）反映在綠色熒光的強度中（圖中展示了24 小時監(jiān)測數(shù)據(jù)）

如果您正在從事EV和外泌體在腫瘤學、干細胞發(fā)育生物學、細胞代謝、精準醫(yī)學等基礎研究，或者正在開展前沿小分子藥物、抗體和基因細胞治療等生物藥新療法的研發(fā)，需要表征細胞內EV攝取行為的同時評估宿主細胞數(shù)量形態(tài)的變化，或更好地了解EV攝入和有效載荷對生物功能的影響，那么賽多利斯EV標記試劑盒將是您理想的選擇！