層浪LongCyteTM 流式細(xì)胞儀用戶項(xiàng)目分享
下面給大家介紹來(lái)自此用戶的項(xiàng)目——精子碎片化檢測(cè)
2023年,世界衛(wèi)生組織(WHO)的一份報(bào)告顯示,全球約有17.5%的適齡生育夫婦受不孕不育的困擾。根據(jù)國(guó)家統(tǒng)計(jì)局?jǐn)?shù)據(jù),我國(guó)不孕不育率約為12%-18%,其中男方原因占40%-50%左右,精子原因居首位。精子DNA碎片(Sperm DNA fragmentation, SDF)在男性不孕癥中發(fā)生率較高,SDF常伴發(fā)少弱精子癥,也可發(fā)生于常規(guī)精液指標(biāo)正常的不育癥患者。其發(fā)生機(jī)制包括精子成熟障礙、凋亡異常和氧化應(yīng)激過(guò)高等。精子碎片化檢測(cè)是精子檢測(cè)中最重要的評(píng)估指標(biāo)之一。
精子SDF的檢測(cè)有很多方法,分為直接法和間接法,直接法有TUNEL、Coment、ISNT;間接法有SCSA、SCD、DBD-FISH。流式常用方法是SCSA(精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析)檢測(cè),與其他檢測(cè)方法相比,流式細(xì)胞術(shù)可以在相對(duì)較短的時(shí)間內(nèi)分析數(shù)千、數(shù)萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,顯著提高了SDF試驗(yàn)的可靠性。在SCSA檢測(cè)中重要指標(biāo)是精子DNA完整性(DFI),即精子DNA碎片率。DFI是指精子在形成過(guò)程中受到某些有害因素(如吸煙、高溫、藥物等)影響,發(fā)生DNA鏈斷裂的精子占全部精子的百分比,使精子DNA完整性被破壞而產(chǎn)生斷裂,DFI值越高則生育能力越低。
檢測(cè)原理:
SCSA 被認(rèn)為是檢測(cè)精子 DNA 損傷的金標(biāo)準(zhǔn)。其原理是:受損的精子DNA 在酸的作用下變性形成單鏈,而正常精子DNA維持雙鏈結(jié)構(gòu)。吖啶橙( AO) 與雙鏈 DNA結(jié)合發(fā)出綠色熒光,而與單鏈DNA結(jié)合發(fā)出紅色熒光。發(fā)綠色熒光表示精子DNA完整,發(fā)紅色熒光代表精子DNA呈碎片化。
樣本準(zhǔn)備(來(lái)自客戶):
1. 樣本在室溫液化30-60min;
2. 將4℃保存試劑A液、B液、C1液和C2液取出,C2離心后,將C2全部轉(zhuǎn)移至C1內(nèi)配成染色液;
3. 檢測(cè)管內(nèi)加入精子樣本10μL,加入 A液90μL,充分吹打混勻;
4. 加入B液200μL,計(jì)時(shí)30s;
5. 30s后時(shí)加入染色液600μL;
6. 染色完成1min后上機(jī)檢測(cè),建議檢測(cè)在染色后40min之內(nèi)完成。
(注:實(shí)驗(yàn)步驟不同試劑廠家有差異)
檢測(cè)報(bào)告:
圖1. 精子檢測(cè)報(bào)告(LongCyteTM)
圖示:Plot1,前散FSC和側(cè)散SSC圈中主群;Plot2,去除碎片信號(hào),圈精子細(xì)胞;Plot3,Green門為綠色熒光信號(hào)的精子細(xì)胞,Red門為已去除碎片的紅色熒光信號(hào)的精子細(xì)胞,即Red門為DNA碎片化的精子細(xì)胞,高綠色熒光信號(hào)群(HDS)為MFI高于正常精子的信號(hào)。(注:Red檢測(cè)通道ECD,620/30;Green檢測(cè)通道FITC,530/30)
臨床上除了精子碎片化檢測(cè)以外;精子相關(guān)其他檢測(cè)項(xiàng)目還有質(zhì)膜完整性檢測(cè),線粒體膜染色、凋亡檢測(cè)、活性氧檢測(cè)、精子Ca2+ 水平檢測(cè)、白細(xì)胞檢測(cè)、頂體反應(yīng)等。層浪流式細(xì)胞儀助力更多精子檢測(cè)相關(guān)的研究和臨床項(xiàng)目。層浪期望與更多生殖機(jī)構(gòu)聯(lián)手助力生殖檢測(cè)發(fā)展。
參考資料:
[1] 倪吳花,AshokAgarwal,孫瑩璞等,精子DNA 碎片檢測(cè)的臨床專家共識(shí), 生殖醫(yī)學(xué)雜志2023年2月第32卷第2期, 1004-3845.2023.02.002
[2] 精子碎片實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與臨床應(yīng)用專家共識(shí)編寫組,精子碎片實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與臨床應(yīng)用專家共識(shí)———基于流式細(xì)胞精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析,中華男科學(xué)雜志 2022 年 2 月 第 28 卷 第 2 期。
[3] Flow cytometry and microscopic acridine orange test: relationship with standard semen analysis [J]. Reproductive BioMedicine Online, 2004, 8(4): 398-407.