CUT&Tag Assay Kit
由普瑞麥迪-研發(fā)團隊推出的CUT&Tag assay kit,完美的解決了ChIP-Seq給您帶來的這些苦惱,成為ChIP-Seq的完美替身!
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CUT&Tag簡介
CUT&Tag是針對ChIP-Seq的局限性而創(chuàng)建的研究基因組中組蛋白修飾以及染色質結合蛋白和DNA相互作用的高效新技術。盡管與ChIP-Seq原理相似,CUT&Tag可以在新鮮細胞原生的狀態(tài)下,利用Tn5轉座酶復合體轉座的特性在獲取片段化DNA的同時完成了末端添加建庫測序所需的擴增引物及條形碼序列。它具備了操作簡單快速 (1-2天可完成建庫),無需交聯(lián)固定和超聲片段化,起始細胞數(shù)少(通常至少降低十倍以上),測序量和成本大大減少(通常降低五到十倍以上),信噪比好,重復性高等優(yōu)勢。在表觀遺傳和基因調控等方面有及其重要的意義!
實驗流程
首先ConA beads(Concanavalin A-coated magnetic beads)與細胞膜或核膜相結合,隨后通過穿孔劑對細胞進行穿孔處理,改變其通透性,依次加入和靶蛋白相對應的一抗、二抗和pA-Tn5 Transposase進行孵育,再通過Mg2+激活Tn5酶,Tn5酶在激活的狀態(tài)下會定向切割靶蛋白對應的DNA片段,同時在切割的DNA兩端加上文庫擴增的序列接頭,以便于直接對回收的DNA片段進行PCR建庫。隨后文庫質量檢測合格后,便可直接上機測序。
我們的優(yōu)勢
√細胞起始量較低(單細胞-5*105),從百萬級降低到單細胞水平
√結果重復性較高,且信噪比較高
√把繁瑣的ChIP流程縮短至1-2天的時間
√操作流程簡單,無需甲醛交聯(lián)、細胞破碎和超聲片段化DNA
√簡化了文庫構建流程,在轉座子上添加了‘接頭’,只需要簡單的PCR即可獲得高質量NGS文庫
√與ChIP相比,測序深度減少10倍左右
H3K4me1抗體的CUT&Tag數(shù)據顯示,與IgG對照組相比,H3K4me1 CUT&Tag檢測到了H3K4me1的信號峰,且信噪比較高。