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瑞沃德直播預告:從理論到實操講透PCR技術

瀏覽次數(shù):2498 發(fā)布日期:2022-7-1  來源:本站 本站原創(chuàng),轉載請注明出處

沃的實驗.png

PCR原理傻傻弄不清楚?
PCR實驗步驟看似簡單卻總是做不好?
不知道不同實驗目的該選哪種PCR?

全線賦能“沃”的實驗之實驗方法實戰(zhàn)教程

直播第六期為大家講解
《PCR技術》
從技術原理、步驟詳解、類型介紹到應用領域
讓你一場直播課吃透PCR

直播時間
7月5日(周二)19:00

報名方式

20220701-1575225503.png

識別上方二維碼,立即免費報名


主題:PCR技術

  • PCR的原理

  • 實驗步驟

  • PCR的分類及實際應用


講師:方晟

20220701-841259569.png

昆明理工大學碩士研究生,已發(fā)表SCI論文4篇,在載體構建、藥物活性篩選、腫瘤模型構建、單細胞數(shù)據(jù)分析等方面有著豐富的經(jīng)驗,研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗癌機理和單細胞測序分析。
 

上期直播間互動問題
這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/strong>


👇👇

Q1:如何去選擇使用全腦缺血還是局部缺血模型呢?
A1:全腦缺血模型——二血管阻斷法,模擬臨床休克、心功能不全、腦血管嚴重狹窄或阻塞等血液低灌流引起的腦循環(huán)障礙;

全腦缺血模型——四血管阻斷法,海馬損傷明顯,可顯示記憶功能減退;

小鼠全腦缺血/再灌注模型——用于篩選腦活性保護成分或缺血性保護劑的研究;

局灶性腦缺血——栓塞法,適用于血栓形成過程研究及溶栓治療觀察,該方法可選材料多樣,能較好模擬腦栓塞;

局灶性腦缺血——線栓法,急慢性局灶性缺血模型,模擬人類缺血性腦血管病的永jiu性及暫時性局灶性缺血的各種狀態(tài),較適合再灌注作用及相關藥物療效的探究;

局灶性腦缺血——光栓法,適合慢性腦缺血研究,抗血小板、抗血栓等藥物及內(nèi)皮細胞保護等方面的探究,該手術方法創(chuàng)傷小,動物可長時間存活,血栓形成過程與人類相似并且可選擇皮層梗死位置;

局灶性腦缺血——開顱法,適用于腦缺血后長期神經(jīng)功能缺損及介入治療和康復的研究,此模型以大腦皮層、尾狀核缺血最明顯。

Q2:小鼠線栓造模選擇什么規(guī)格的尼龍線?
A2:可以參考如下瑞沃德售賣的尼龍線規(guī)格

 

線徑(尼龍線號)

 

總線長(mm)

 

規(guī)格

 

包裝

 

動物體重(g)

 

0.10

 

30

 

MSMC19B100PK50

 

50根

 

15~20g小鼠

 

0.10

 

30

 

MSMC21B100PK50

 

50根

 

21~25g小鼠

 

0.12

 

MSMC21B120PK50

 

50根

 

0.10

 

30

 

MSMC23B100PK50

 

50根

 

26~30g小鼠

 

0.12

 

MSMC23B120PK50

 

50根

 

0.12

 

30

 

MSMC25B120PK50

 

50根

 

31~35g小鼠

 

0.15

 

MSMC25B150PK50

 

50根

 

0.15

 

30

 

MSMC26B150PK50

 

50根

 

>35g小鼠


Q3:光栓造模光束的功率多少合適呢?

A3:

 

 血管直徑(μm)

 

 激光波長(nm)

 

 激光強度(W/cm2)

 

  染料

(mg/kg體重)

 

  10-40

 

 

  458-488

 

  0.2

 

  黃素單核苷酸(37)

 

  180-240

 

 

  458

 

  15

 

  黃素單核苷酸(>37)

 

  10-40

 

 

  514.5

 

  11

 

  藻紅B(35)

 

  180-240

 

 

  514.5

 

 

  16

 

 

  孟加拉玫瑰紅(20)

 

 

  700-1400

 

 

  514.5

 

 

  160

 

 

  孟加拉玫瑰紅(40)

 

 

  700-1400

 

 

  514.5

 

 

  50

 

 

  藻紅B(35)

 

 

  10-40

 

 

  532

 

 

  0.2-0.25

 

 

  孟加拉玫瑰紅(10)藻紅B(12.5)

 

 

  50-150

 

 

  532

 

 

  0.5-5.0

 

 

  孟加拉玫瑰紅(10)藻紅B(12.5)

 

 

  180-240

 

 

  532

 

 

  10.0-12.0

 

 

  孟加拉玫瑰紅(20)藻紅B(25)

 

 

  700-1400

 

 

  532

 

 

  130-180

 

 

  孟加拉玫瑰紅(20)藻紅B(25)

 

 

  10-40

 

 

  562

 

 

  0.25

 

 

  孟加拉玫瑰紅(10)

 

 

  180-240

 

 

  562

 

 

  13

 

 

  孟加拉玫瑰紅(20)

 

 

  700-1400

 

 

  562

 

 

  22

 

 

  孟加拉玫瑰紅(40)

 

 

Q4:MCAO模型成功的判定標準有哪些?

A4:可使用激光散斑血流成像系統(tǒng)或激光多普勒血流儀進行生理學檢測,血流變化率>70%即可初步判斷模型成功,同步配合神經(jīng)行為評分及TTC染色綜合判定。

Q5:如何提高模型的存活率呢,有什么建議呢?

A5:(1)麻醉對死亡率影響較大,推薦使用吸入麻醉;

(2)控制缺血時間,缺血時間過長將導致死亡率的上升;

(3)維持術中及術后體溫,可維持正常生理體征,推薦使用體溫維持儀;

(4)可使用抗生素抗感染。
 

Q6:大鼠內(nèi)皮素腦內(nèi)注射誘導的局灶性腦缺血模型的操作及坐標點位置?

A6:(1)剪去動物顱頂?shù)拿l(fā),正中線向左旁開 0.2 cm行縱向切口,長約 1.5 cm。剪開皮膚,分離皮下筋膜,暴露顱骨表面,將顱骨骨膜刮除,骨膜處理的好處在于能夠更清楚的觀察骨縫,便于定位和固定,并有助于止血;

(2)將假電極移至 Bregma 點上,然后移動假電極至所需位置,并作好標記;

(3)移開假電極,在標記處用牙科鉆鉆一直徑 1 mm 左右的小孔,以鉆透硬腦膜為度;

(4)在顱骨其他部位鉆兩顆眼鏡螺絲,深度不能超過顱骨厚度。將假電極換成 26-gauge(6.5 號注射針)的套管,按上述定位方法,將套管通過小孔下至硬腦膜,并以此位置為起始,向腹側深入到腦的梨狀皮質內(nèi) MCA 背側 1~2 mm。該位點的參數(shù)為 Bregma 前 0.2 mm,外側 5.2 mm,硬腦膜下 6.1 mm,或 Bregma 后 0.3 mm,外側 5.6 mm,硬腦膜下 7.0 mm、

(5)用牙科水泥將套管固定于螺絲和顱骨上,5%聚維酮碘消毒創(chuàng)面。
 

Q7:在實驗過程中分離了頸總動脈之后發(fā)現(xiàn)頸外動脈和頸內(nèi)動脈是一上一下的,如何分辨這兩個呢?

A7:頸內(nèi)動脈看似在外,它從血管分叉處延伸出一小段就有向下走的趨勢,基本沒有側枝;頸外動脈看似在內(nèi),相比頸內(nèi)動脈表淺,側枝較多。

 

Q8:腦缺血造模之后一般可以做什么行為學呢?

A8:

A8.png

Q9:TTC染色不成功有哪些原因呢?
A9:可能性較多,包括了手術、試劑、染色注意事項、反面、PBS配置等等。如遇到TTC染色不成功,可以從以上各個方面去依次排除原因。


Q10:激光散斑血流成像系統(tǒng)的成像范圍有多大,時間大概需要多久呢?
A10:成像范圍是5.7mm*7.5mm-22.5cm*30cm,成像時間為0.01s/幀,全分辨率采樣速度100FPS。
 

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相關公司:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司
聯(lián)系電話:400-966-9516
E-mail:rwd@rwdls.com


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