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瑞沃德直播:理論+實(shí)例攻克單細(xì)胞制備與流式細(xì)胞術(shù)

瀏覽次數(shù):2115 發(fā)布日期:2022-5-30  來源:本站 本站原創(chuàng),轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處

單細(xì)胞樣本制備老失?
流式實(shí)驗(yàn)得到數(shù)據(jù)不可靠?
流式圖不知道怎么分析?

全線賦能“沃”的實(shí)驗(yàn)之實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程
直播第四期將帶來

《流式細(xì)胞術(shù)》
從單細(xì)胞制備到流式細(xì)胞術(shù),理論+實(shí)例
帶你快速get到其中的難點(diǎn)要點(diǎn)


直播時(shí)間
5月31日(周二)19:00

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主題:?jiǎn)渭?xì)胞懸液樣本的分類及制備

  • 單細(xì)胞懸液樣本類型
  • 制備注意事項(xiàng)
  • 制備方法實(shí)例

講師:馮啟崢


瑞沃德高級(jí)產(chǎn)品方案經(jīng)理,專注動(dòng)物傳染病學(xué)和細(xì)胞與分子免疫學(xué)研究多年,在動(dòng)物疫苗研發(fā)、CRISPR的原核細(xì)胞應(yīng)用方面有著較為豐富的經(jīng)驗(yàn),致力于為客戶提供專業(yè)的細(xì)胞與分子生物研究方案。

主題:流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用
  • 儀器基本結(jié)構(gòu)解析
  • 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)操講解
  • 技術(shù)應(yīng)用介紹

講師:方晟

昆明理工大學(xué)碩士研究生,已發(fā)表SCI論文4篇,在載體構(gòu)建、藥物活性篩選、腫瘤模型構(gòu)建、單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析等方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn),研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗癌機(jī)理和單細(xì)胞測(cè)序分析。

 

上期直播間互動(dòng)問題
這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/strong>


1、做外周神經(jīng)損傷的小鼠能活多久?如何飼養(yǎng)?
外周神經(jīng)損傷一般不會(huì)造成動(dòng)物的死亡,但一些特殊情況會(huì)影響動(dòng)物的存活率,比如為了避免在手術(shù)部位引起不良組織炎癥,我們應(yīng)該盡量縮短手術(shù)時(shí)間,如果手術(shù)部位意外出血,要用棉簽適當(dāng)按壓。如果出血沒有停止,就不要對(duì)這只動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。術(shù)后動(dòng)物應(yīng)該放進(jìn)干凈的鼠籠并分籠飼養(yǎng),注意保溫。

2、脊髓損傷造模后,動(dòng)物出現(xiàn)功能障礙不能自主排尿該如何護(hù)理?
每日按壓排尿3次,以防泌尿系統(tǒng)感染;連續(xù)3天,每天兩次向腹腔注射相同劑量青霉素預(yù)防感染。

3、使用纖維蛋白膠修復(fù)的是外周神經(jīng)損傷的哪個(gè)類型或者說等級(jí)呢?
纖維蛋白膠可以應(yīng)用于橫斷的神經(jīng),幫助受傷神經(jīng)的近端和遠(yuǎn)端殘端緊密對(duì)齊,是神經(jīng)縫合技術(shù)的一種替代方式。

4、坐骨神經(jīng)擠壓的結(jié)扎力度如何把控?
有一些文獻(xiàn)上會(huì)使用帶有力值的工具進(jìn)行擠壓神經(jīng),如果我們沒有這類的工具,可以使用血管夾對(duì)神經(jīng)進(jìn)行夾持,保證力度的一致性。

5、有專門評(píng)估大小鼠前肢抓取能力的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)嗎?
針對(duì)于前肢的抓取能力,爪抓力測(cè)試儀可以測(cè)動(dòng)物前肢,后肢的抓力,另外如果是判斷動(dòng)物前肢抓取食物的精細(xì)運(yùn)動(dòng),可以用樓梯式抓取測(cè)試儀來進(jìn)行。

6、目前好像2D步態(tài)分析居多,慢慢也看到了3D步態(tài)分析,兩者相比各自有什么優(yōu)缺點(diǎn)呢?
步態(tài)沒有2D、3D的區(qū)別,國內(nèi)使用較多的步態(tài)有2種:第一種是依靠壓力感應(yīng)可以生成動(dòng)物腳掌受力的情況,判斷動(dòng)物的損傷情況;第二種是通過視頻記錄動(dòng)物足部在運(yùn)動(dòng)時(shí)的軌跡,通過足部的運(yùn)動(dòng)過程計(jì)算生成動(dòng)物活動(dòng)過程中四肢運(yùn)動(dòng)的各項(xiàng)指標(biāo)來判斷動(dòng)物的損傷情況。這兩種方法從2個(gè)不同的方面完善了步態(tài)的分析數(shù)據(jù),但實(shí)際上無法互相替代。一般來說大鼠步態(tài)用第一種壓力感應(yīng)測(cè)試的會(huì)多一些,小鼠步態(tài)則用視頻記錄的多一些。所謂的3D步態(tài)是通過從側(cè)面拍攝動(dòng)物運(yùn)動(dòng)時(shí)的腿部活動(dòng),對(duì)動(dòng)物的步態(tài)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行更為細(xì)致的評(píng)估,與傳統(tǒng)步態(tài)記錄的是2個(gè)維度的信息,無法進(jìn)行替代。由于需要識(shí)別動(dòng)物腿部的關(guān)節(jié),目前無法與足底步態(tài)很好的融合結(jié)果。

7、這種轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)是可以大小鼠通用的嗎?如何檢測(cè)到掉落?
轉(zhuǎn)棒大小鼠主機(jī)通用,但是跑道是需要替換的。設(shè)備通過紅外感應(yīng),電子感應(yīng)等自動(dòng)檢測(cè)動(dòng)物掉落情況,停止計(jì)時(shí)。

8、外周神經(jīng)損傷會(huì)導(dǎo)致疼痛致敏,在模型檢測(cè)中可以用什么疼痛檢測(cè)方法呢?
主要看測(cè)痛的部位,機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來進(jìn)行測(cè)試,針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀(三叉神經(jīng)),壓感測(cè)痛儀(背部,較大的關(guān)節(jié)),鉗式測(cè)痛儀(整個(gè)腳,細(xì)小的關(guān)節(jié)),熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部,使用紅外測(cè)痛儀或者甩尾測(cè)痛儀。

9、怎么手動(dòng)排尿?
按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久?
術(shù)后需輕輕按摩擠壓膀胱進(jìn)行排尿,每次按摩到排空,每天至少三次。

11、不規(guī)則梯和錯(cuò)步分析儀是不是指一個(gè)東西。
是一種類型的儀器,不同廠家的名稱,測(cè)試方法,輸出的指標(biāo)會(huì)略有不同。

12、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)一直做不出差異怎么辦?
可能有2種原因:

①測(cè)試時(shí)動(dòng)物已經(jīng)恢復(fù)到與正常鼠一致的水平,所以做不出差異。

解決方法:將轉(zhuǎn)棒測(cè)試時(shí)間提前。

②測(cè)試難度過于簡(jiǎn)單或者過于困難,導(dǎo)致差異很小,從而統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果無差異。

解決方法:調(diào)整實(shí)驗(yàn)難度,直到可以做出差異的結(jié)果。新型轉(zhuǎn)棒儀除了原先的勻速和勻加速以外還增加了階段加速等測(cè)試方法,實(shí)驗(yàn)難度有了更大的調(diào)整空間。

13、兩爪及四爪攀爬實(shí)驗(yàn)有合適的實(shí)驗(yàn)設(shè)備嗎?

不規(guī)則梯結(jié)合自制實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

14、脊髓損傷后有哪些評(píng)估手段?
脊髓損傷后可通過行為學(xué)對(duì)運(yùn)動(dòng)及感覺進(jìn)行評(píng)估。BBB法:一般用于觀察大鼠后肢行走及肢體活動(dòng),評(píng)分分為三個(gè)部分,0-7分評(píng)判動(dòng)物后肢關(guān)節(jié)活動(dòng)情況,8-13分評(píng)判后肢步態(tài)及協(xié)調(diào)功能,14-21分評(píng)判運(yùn)動(dòng)中爪的精細(xì)活動(dòng);BMS評(píng)分是在BBB評(píng)分基礎(chǔ)上針對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)做出了完善和修改,是專門用于小鼠后肢功能的評(píng)分方法。其他運(yùn)動(dòng)相關(guān)行為學(xué):步態(tài)分析系統(tǒng)用于評(píng)估步態(tài)動(dòng)力學(xué)、協(xié)調(diào)性分析、平衡性分析等;轉(zhuǎn)棒儀可評(píng)估動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性;行走障礙分析儀可分析簡(jiǎn)單步態(tài)及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性等。感覺功能相關(guān)行為學(xué):Vonfrey測(cè)痛針用于評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性;冷熱盤用來測(cè)試動(dòng)物對(duì)冷熱刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠嗎 ?
有小鼠平衡木可以進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)。

16、請(qǐng)問外周神經(jīng)損傷后有哪些手段可以評(píng)價(jià)感覺功能的損失?
感覺功能相關(guān)行為學(xué):機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來進(jìn)行測(cè)試,評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性,針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀(三叉神經(jīng)),壓感測(cè)痛儀(背部,較大的關(guān)節(jié)),鉗式測(cè)痛儀(整個(gè)腳,細(xì)小的關(guān)節(jié)),熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部,使用紅外測(cè)痛儀(用于量化對(duì)小鼠和大鼠后爪輻射或紅外熱刺激的熱閾值的方法)或者甩尾測(cè)痛儀(一種基于對(duì)嚙齒動(dòng)物中熱刺激回避反應(yīng)的潛伏期測(cè)量的疼痛實(shí)驗(yàn))。

 

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