海貍磁珠-mRNA疫苗質(zhì)量控制關(guān)鍵原料限量試用20份！
瀏覽次數(shù)：5403 發(fā)布日期：2022-5-9
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| 全球十大突破性技術(shù)榜首--mRNA疫苗 |
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2021年2月24日，《MIT Technology Review》發(fā)布了“全球十大突破性技術(shù)”名單，其中榜首即是mRNA疫苗。從2019年12月新冠爆發(fā)到2022年4月1號(hào)，全球新冠確診已超4.8億。新冠病毒的蔓延促進(jìn)了mRNA疫苗的發(fā)展。mRNA疫苗在新冠疫苗開(kāi)發(fā)方面的成功，也促進(jìn)了其在各種傳染病與腫瘤等治療方面廣闊的應(yīng)用前景。
mRNA疫苗的生產(chǎn)流程包括序列設(shè)計(jì)、mRNA體外轉(zhuǎn)錄、體外修飾（加帽、加尾）、脂質(zhì)體包被等過(guò)程。2020年發(fā)布的《預(yù)防用新型冠狀病毒mRNA疫苗藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》中對(duì)mRNA的質(zhì)量提出了一系列的要求，加帽率和加尾長(zhǎng)度是其中最關(guān)鍵的2個(gè)指標(biāo)。5’cap (5’帽)結(jié)構(gòu)是翻譯起始所必須的結(jié)構(gòu)，為核糖體識(shí)別mRNA提供信號(hào)，并協(xié)助核糖體與mRNA結(jié)合使翻譯從起始密碼子開(kāi)始。3’poly(A)（3’尾）可以控制mRNA的穩(wěn)定性，以防降解，所以在mRNA合成修飾過(guò)程中，需要對(duì)5’加帽效率和3’poly(A)尾的分布進(jìn)行監(jiān)控。 |
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圖.1 mRNA的結(jié)構(gòu)可以分為5個(gè)部分，
包含5’cap，5’UTR，ORF，3’UTR和3’polyA。 |
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| 疫苗mRNA因?yàn)殚L(zhǎng)度較大，為幾千個(gè)核苷酸，而無(wú)法直接進(jìn)行檢測(cè)，因此需要將5’ cap和3’ poly(A)端酶切成短片段，酶切之后5’ cap和3’ poly(A)均可以通過(guò)納米磁珠進(jìn)行高通量、快速分離，這種納米磁珠通常粒徑在1-3μm之間。 |
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| 測(cè)定加帽效率主要是通過(guò)將5’cap端與生物素標(biāo)記的引物退火，然后將5’cap端酶切成小片段，通過(guò)SA磁珠捕獲出biotin標(biāo)記部分，然后將5’cap從磁珠表面洗脫，通過(guò)毛細(xì)管凝膠電泳或質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)（圖2）。 |
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| 圖2. mRNA 5’帽子序列酶切，磁珠分離純化流程 |
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| 3’PolyA尾的檢測(cè)方法與5’加帽效率的檢測(cè)方法類似，需要通過(guò)酶切的方式獲得3’端的Poly A尾短鏈，然后利用Oligo dT磁珠分離純化，再分別進(jìn)行毛細(xì)管電泳或質(zhì)譜準(zhǔn)確分析其長(zhǎng)度分布（圖3）。 |
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| 圖3. 3’ Poly(A)尾分布的檢測(cè)流程 |
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在mRNA的5’端加帽效率和3’加尾分布的檢測(cè)過(guò)程中，都需要磁珠進(jìn)行mRNA片段的富集。磁珠的性能影響到整個(gè)檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，該過(guò)程中的磁珠一般需要如下的特征：
a) 非特異性吸附低；
b) 靈敏度高，磁珠表面具有豐富的結(jié)合位點(diǎn)；
c) RNA易洗脫，磁珠表面需要特殊的封閉；
d) 耐受有機(jī)溶劑，部分操作會(huì)使用95%乙醇，對(duì)磁珠的溶劑耐受性有很大的要求。 |
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BeaverBeads® Streptavidin磁珠，表面共價(jià)修飾有大量的鏈霉親和素蛋白，可高效快速地結(jié)合生物素化抗 體、核酸、蛋白等生物配體。
BeaverBeads® Oligo (dT) 磁珠，表面共價(jià)偶聯(lián) Oligo (dT)，可與真核生物 mRNA 尾部的 Poly A 互補(bǔ)配對(duì)，可高效地從真核生物總 RNA 或直接從動(dòng)植物組織或細(xì)胞裂解物中快速分離出完整、高純度的 mRNA。
分離得到的 mRNA 可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：RT-PCR、 固相 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RACE、Northern 等。該類產(chǎn)品為超順磁性微球，可配套自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行高通量操作。 |
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| 表1. BeaverBeads® Streptavidin / Oligo (dT)產(chǎn)品性能 |
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| 海貍生物創(chuàng)立于2011年，位于蘇州工業(yè)園區(qū)，場(chǎng)地超過(guò)12000㎡。企業(yè)專注于納米磁珠技術(shù)的研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化，服務(wù)于體外診斷、生物制藥、動(dòng)物疫病檢測(cè)、環(huán)境檢測(cè)、食品藥品安全檢測(cè)、生物科研等領(lǐng)域；提供納米磁珠原料、蛋白偶聯(lián)中間體、免疫標(biāo)記與捕獲磁珠、核酸提取磁珠及試劑盒、真菌毒素凈化試劑盒等產(chǎn)品并輔助自動(dòng)化設(shè)備及配套的生物耗材；擁有ISO9001和ISO13485國(guó)際質(zhì)量管理體系認(rèn)證，部分產(chǎn)品獲得I類醫(yī)療器械備案和生產(chǎn)許可。 |
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