人二倍體細(xì)胞來(lái)源于正常人胚胎，為人源有限傳代系，在傳代過(guò)程中保持二倍體核型，避免了傳代細(xì)胞生產(chǎn)所帶來(lái)的致癌性風(fēng)險(xiǎn)，具有較高安全性，也較原代動(dòng)物細(xì)胞外源因子傳播風(fēng)險(xiǎn)更低，因此被廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)。人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗更是被WHO譽(yù)為狂犬病疫苗金標(biāo)準(zhǔn)，具有免疫原性好、起效速率快、安全性好、免疫持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。
 
中生天信和針對(duì)人二倍體細(xì)胞開(kāi)發(fā)了 ToCell® HDC SLM-A低血清細(xì)胞培養(yǎng)基，無(wú)動(dòng)物源成分，可適用于MRC5細(xì)胞和2BS細(xì)胞的低血清高密度貼壁培養(yǎng)。
 
HDC SLM-A細(xì)胞培養(yǎng)基
 
HDC SLM-A細(xì)胞培養(yǎng)基的特點(diǎn)
◆ 更低的血清添加量    
◆ 無(wú)動(dòng)物源成分   
◆ 更快的生長(zhǎng)速度    
◆ 提高生產(chǎn)效率 HDC SLM-A細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用
適用于人二倍體細(xì)胞低血清高密度貼壁培養(yǎng)環(huán)境，并滿足水痘、狂犬、乙腦、甲肝等疫苗工藝生產(chǎn)需求。
 
人二倍體細(xì)胞低血清培養(yǎng)工藝
 
方瓶培養(yǎng)
以2BS細(xì)胞為例：
（1）接種密度：4.5×10⁶cells/T75。
（2）培養(yǎng)液：30ml。
（3）傳代時(shí)間：72-96h。
（4）傳代依據(jù)：細(xì)胞在方瓶中長(zhǎng)成致密單層后進(jìn)行傳代。
（5）培養(yǎng)液pH：不得低于7.0。
細(xì)胞工廠培養(yǎng)
   細(xì)胞復(fù)蘇后從方瓶擴(kuò)增至細(xì)胞工廠，一個(gè)5層細(xì)胞工廠接種100×10⁶cells（按3×10⁴cells/cm²），加培養(yǎng)液150-200ml/層，培養(yǎng)3-4天，待細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層后進(jìn)行傳代。
細(xì)胞工廠傳代：
（1）緩慢棄去細(xì)胞工廠中的培養(yǎng)液，加入PBS潤(rùn)洗1-2遍。
（2）棄去PBS后加入約25ml/層0.25%胰酶溶液（若使用無(wú)EDTA的胰酶，可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）。
（3）充分浸潤(rùn)細(xì)胞1-2min后，棄去胰酶，將細(xì)胞工廠置于37℃溫箱5-6min。
（4）鏡檢90%以上細(xì)胞均變圓變亮后拍打細(xì)胞工廠，使細(xì)胞分散。
（5）再加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，并晃動(dòng)細(xì)胞工廠，使細(xì)胞從細(xì)胞工廠完全脫落。
（6）將重懸好的細(xì)胞倒入無(wú)菌容器混勻后取樣計(jì)數(shù)，進(jìn)行下一步擴(kuò)增、培養(yǎng)。
 
注意事項(xiàng)
（1）保證細(xì)胞來(lái)源可靠，并檢測(cè)無(wú)支原體及外源病毒污染。
（2）人二倍體細(xì)胞連續(xù)傳代次數(shù)有限，需采用低代次細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
（3）每次傳代使用新的方瓶、細(xì)胞工廠。
（4）棄液時(shí)，盡量棄于滅菌容器中，減小污染風(fēng)險(xiǎn)。
（5）細(xì)胞工廠接種需加入培養(yǎng)基充分混勻細(xì)胞，保證每層細(xì)胞數(shù)相對(duì)均勻。
（6）培養(yǎng)過(guò)程中觀察細(xì)胞時(shí)盡可能不要過(guò)度晃動(dòng)細(xì)胞工廠，防止已貼壁的細(xì)胞有局部脫落可能。
 
異常處理
（1）培養(yǎng)過(guò)程中盡可能分開(kāi)進(jìn)行種細(xì)胞傳代。
（2）如遇細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)液渾濁，請(qǐng)選擇當(dāng)天不進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的房間進(jìn)行取樣鏡檢，鏡檢下有明顯游動(dòng)的微生物則很可能是細(xì)菌污染，若不是特別明顯可取一些培養(yǎng)液在TSA平板中培養(yǎng)24-72h觀察。
（3）如遇培養(yǎng)液清澈，但細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受限或死亡，請(qǐng)選擇當(dāng)天不進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的房間進(jìn)行取樣，進(jìn)行支原體或外源病毒檢測(cè)。
（4）確定污染后務(wù)必棄去所有污染細(xì)胞、停用使用中的培養(yǎng)基，對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行徹底消毒滅菌后再進(jìn)行下批實(shí)驗(yàn)。
 
 
關(guān)于中生天信和
中生天信和——國(guó)藥集團(tuán)·中國(guó)生物旗下子公司，致力于為中國(guó)生物制藥產(chǎn)業(yè)提供領(lǐng)先的生物制藥過(guò)程支撐技術(shù)，提升中國(guó)生物制藥上游原材料以及裝備的自主可控能力，加快生物制藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
【核心優(yōu)勢(shì)業(yè)務(wù)】
個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)
生物反應(yīng)器自主設(shè)計(jì)與制造
生物制藥過(guò)程工藝技術(shù)開(kāi)發(fā)
 
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