EV Flow Cytometry Working Group是一個合作性組織,里面的成員是細(xì)胞外囊泡、流式細(xì)胞儀和實驗室醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的科學(xué)家、創(chuàng)新者和專家,致力于開發(fā)更強(qiáng)大的流式細(xì)胞技術(shù)來研究包括外泌體和其他胞外囊泡在內(nèi)的亞微米顆粒。該組織是由國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(ISEV)、國際流式細(xì)胞技術(shù)促進(jìn)學(xué)會(ISAC)和國際血栓形成與止血學(xué)會(ISTH)三大學(xué)會的一批科學(xué)家于2015年4月25日,在ISEV年會上成立。
Apogee超靈敏納米流式細(xì)胞儀以其強(qiáng)大的光學(xué)模塊和優(yōu)異的散射光檢測能力,在細(xì)胞外囊泡/外泌體檢測方面獲得許多EV Flow Cytometry Working Group成員的青睞,并利用Apogee納米流式技術(shù)進(jìn)行多種細(xì)胞外囊泡/外泌體檢測實驗方法的校準(zhǔn)和優(yōu)化,發(fā)表了多篇JEV期刊。
同時EV Flow Cytometry Working Group還會定期舉辦在線講座,邀請細(xì)胞外囊泡/外泌體研究領(lǐng)域的專家學(xué)者進(jìn)行技術(shù)交流,為了讓大家更便捷地了解國外EVs圈的專家學(xué)者們的工作,伯齊科技將持續(xù)分享EV Flow Cytometry Working Group的在線講座,感興趣的老師可以關(guān)注伯齊微信公眾號,及時獲取最新資訊。
主題
Size and refractive index determination of sub-micrometer particles using the flow cytometry scatter ratio (Flow-SR)
Edwin van der Pol博士,Amsterdam University Medical Centers, Netherlands
流式細(xì)胞儀以任意單位測量光散射信號,這阻礙了對數(shù)據(jù)的解釋和比較,而這些光散射信號卻又包含了關(guān)于粒子大小和組成的重要信息。現(xiàn)在這些信息可以通過校準(zhǔn)來評估,這意味著將任意單位轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)化測量單位,例如以納米為單位的直徑。有一種散射檢測器可以通過測量微球并用Mie理論來描述信號,同時考慮流式細(xì)胞儀的光學(xué)結(jié)構(gòu)和微球的大小和折射率(RIs)來校準(zhǔn)。RI是粒子的一種固有特性,它取決于粒子的組成,決定了粒子散射光的效率。當(dāng)RI已知且散射檢測器被校準(zhǔn)時,Mie理論可用于推導(dǎo)胞外囊泡(EVs)的直徑[1]。在本次講座中,將解釋通過獲取側(cè)散射和前向散射信號之間的比率,即流式細(xì)胞儀散射光比例分析法(Flow-SR),可以同時測定亞微米顆粒的直徑和RI[2]。Flow-SR分析法可以實現(xiàn)對血漿中的EVs(RI<1.42)和脂蛋白顆粒(RI>1.45)進(jìn)行無標(biāo)記區(qū)分,并可用于評價抗體標(biāo)記的特異性。我們可自動化Flow-SR分析法,并將其應(yīng)用于EVs臨床研究的數(shù)據(jù)分析[3]。
[1] De Rond et al. Deriving extracellular vesicle size from scatter intensities measured by flow cytometry. Curr. Protoc. Cytom. e43, 1-14 (2018)
[2] van der Pol et al. Absolute sizing and label-free identification of extracellular vesicles by flow cytometry. Nanomedicine 14, 801-10 (2018)
[3] Gasecka et al. Ticagrelor attenuates the increase of extracellular vesicles concentrations in plasma after acute myocardial infarction compared to clopidogrel. J. Thromb. Haemost. 18(3), 609-623 (2020)
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