外泌體微囊泡因其攜帶蛋白,脂分子和核酸等物質(zhì),在細胞之間信號傳導(dǎo)方面扮演重要角色,在重大疾病基礎(chǔ)研究,臨床診斷與治療等方面均引起了極大關(guān)注。
流式分析技術(shù),因其可對單顆粒樣品進行快速,多參數(shù)和精準(zhǔn)定量分析,快速成為外泌體微囊泡分析的有力工具。
然而,外泌體微囊泡因其尺寸偏。ㄒ话惴植荚30-300nm,主要集中在100-200nm),大小不一,樣品濃度高,折射率低,形態(tài)和組成高度異質(zhì)性,給流式分析技術(shù)帶來極大挑戰(zhàn):
傳統(tǒng)流式分析技術(shù),其散射光靈敏度專注分析細胞,一般無法利用散射光直接分析小于300nm的外泌體微囊泡小顆粒;
有些流式方案嘗試用熒光標(biāo)記方案分析外泌體微囊泡,卻常會面臨集群分析問題,難以絕對精準(zhǔn)定量和單顆粒熒光標(biāo)記分析(因其液流系統(tǒng)原本專為大顆粒分析優(yōu)化設(shè)計,樣本流速多在10ul/min以上);
即使有些流式分析方案,在散射光靈敏度方面先后取得了技術(shù)突破,仍又時常面臨分析外泌體微囊泡這一特殊樣品對儀器靈敏度,穩(wěn)定性以及檢測速度方面要求極高的問題。
那么如何全面評估所選流式方案,是否可以更靈敏,更精準(zhǔn),更穩(wěn)定,更快速的分析大量外泌體微囊泡樣品呢?
近日來自加拿大阿爾伯塔大學(xué)和專注體外診斷先進技術(shù)研發(fā)的Nanostics公司等用戶單位,結(jié)合自身優(yōu)勢經(jīng)驗,給出外泌體微囊泡納米流式分析性能驗證的最佳標(biāo)準(zhǔn)。該驗證標(biāo)準(zhǔn)分析角度極其嚴(yán)謹(jǐn)全面,具體驗證內(nèi)容包括以下十個方面:
1.靈敏度&分辨率
2.重復(fù)性&穩(wěn)定性
3.精準(zhǔn)性&準(zhǔn)確性
4.樣品殘留率
5.流速穩(wěn)定性
6.濃度分析線性度
7.熒光分析靈敏度&線性度
8.單顆粒分析&集群分析
9.獲得統(tǒng)計意義數(shù)據(jù)所需時間
10.相同樣品重復(fù)連續(xù)上樣穩(wěn)定性
以上測試工作,研究人員采用Apogee納米流式用于分析驗證。其中,Apogee納米流式專為納米顆?焖,多參數(shù),超靈敏和精準(zhǔn)分析優(yōu)化設(shè)計,其極佳穩(wěn)定性能備受認可關(guān)注,在外泌體微囊泡等納米顆粒樣本方面參與發(fā)表數(shù)百篇應(yīng)用文章。以上十項性能驗證結(jié)果顯示,Apogee納米流式測試結(jié)果全部通過了臨床級高標(biāo)準(zhǔn)分析要求。這對外泌體微囊泡臨床樣品研究分析,基礎(chǔ)科研高標(biāo)準(zhǔn)高穩(wěn)定性分析以及納米流式極佳性能全面分析具有極其重要參考價值。更具體參考信息,請點擊參考文獻。
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