對(duì)SARS-CoV-2患者免疫反應(yīng)的表征，是了解COVID-19疾病進(jìn)展或者疫苗功效的關(guān)鍵。SARS-CoV-2抗原例如刺突蛋白（Spike Protein），S1和S2亞基，S1受體結(jié)合域（S1 RBD）以及病毒核衣殼蛋白（Nucleocapsid Protein）均可以刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，產(chǎn)生相應(yīng)抗體。因此，不同抗原的反應(yīng)性可能揭示了疾病進(jìn)展的不同階段。例如，與核衣殼的反應(yīng)性可能是病毒早期感染的敏感性指標(biāo)，而與S1 RBD和刺突蛋白的其他部分的反應(yīng)性可能與病毒的中和有關(guān)。

血清學(xué)免疫檢測(cè)的常見方法是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法。但這種方法會(huì)面臨：

• 每個(gè)孔只檢測(cè)一個(gè)抗原，所以提供針對(duì)SARS-CoV-2的復(fù)雜免疫學(xué)信息受限；

• 因?yàn)榭乖�信息提供有限，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性；

• 手動(dòng)操作時(shí)間長(zhǎng)，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較差。

   

為了克服這些局限，

全自動(dòng)Western多抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑盒已上市！！

全自動(dòng)Western多抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：

• 一份樣品可檢測(cè)5個(gè)抗原血清反應(yīng)性指標(biāo)：刺突蛋白（Spike Protein）、S1亞基、S2亞基、S1受體結(jié)合域（S1 RBD）、病毒核衣殼蛋白（Nucleocapsid Protein）；

• 提供5個(gè)抗原的分子量信息，且不影響靈敏度；

• 通過(guò)相對(duì)峰面積定量抗原反應(yīng)性，提供SARS-CoV-2病人的復(fù)雜免疫學(xué)反應(yīng)信息；

• 血清樣品量可低至1μl；

• 全自動(dòng)Western，無(wú)人為操作誤差；

• 檢測(cè)速度快，3小時(shí)出結(jié)果。

   

檢測(cè)原理：

應(yīng)用舉例：

一份樣品提供多種抗原信息

為了測(cè)試血清樣品對(duì)這些抗原的反應(yīng)性，對(duì)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）確認(rèn)為COVID-19陽(yáng)性的4位患者的血清樣品以及2份陰性樣品進(jìn)行全自動(dòng)Western的血清學(xué)檢測(cè)。結(jié)果顯示，PCR陽(yáng)性血清樣品與試劑盒中包含的抗原具有高度反應(yīng)性，PCR陰性血清樣品沒有反應(yīng)性發(fā)生。其中PCR陽(yáng)性3號(hào)樣品中，可以顯示出該血清樣本對(duì)5個(gè)抗原（刺突蛋白（Spike Protein）、S1亞基、S2亞基、S1受體結(jié)合域（S1 RBD）、病毒核衣殼蛋白（Nucleocapsid Protein））均有反應(yīng)性。

一份樣本提供多種體液免疫學(xué)表征

當(dāng)對(duì)相對(duì)峰面積進(jìn)行定量時(shí)，結(jié)果顯示了與患者血清樣品中的5種抗原中的每一種的IgG反應(yīng)性的高度可變性。例如，患者4的血清樣本與核衣殼的反應(yīng)性高（占總峰面積的68％）。而患者1、2、3的血清樣本與核衣殼的反應(yīng)性低得多（分別為7％，3％和34％），但與Spike蛋白反應(yīng)性增加。這預(yù)示著患者4血清樣本中顯示其對(duì)早期感染的指標(biāo)敏感，而患者1、2和3的血清樣本中可能已產(chǎn)生與靶向刺突蛋白上的表位相結(jié)合的中和抗體。

良好的稀釋線性

對(duì)PCR陽(yáng)性血清樣品從1：40到1：138240進(jìn)行稀釋系列，一式兩份，并使用SARS-CoV-2多抗原血清學(xué)檢測(cè)模塊進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，信號(hào)隨著血清樣品濃度的降低而降低（圖A-C），并且該測(cè)定法顯示出良好的線性，在3.5 log滴定系列中，五個(gè)抗原中的四個(gè)抗原的R²≥0.99，第五個(gè)抗原的R²≥98％（圖D）。

高重復(fù)性

超過(guò)檢測(cè)極限或≥1：69120的血清稀釋液的CV小于15％，這表明該方法在重復(fù)測(cè)量中具有極好的可重復(fù)性。

結(jié)論：

隨著SARS-CoV-2入侵機(jī)體的發(fā)展，可能會(huì)出現(xiàn)幾種不同的抗原，這些抗原會(huì)導(dǎo)致體液免疫反應(yīng)異常，而針對(duì)這些抗原的抗體的出現(xiàn)可能表明了疾病進(jìn)展和病毒中和的不同階段。因此，傳統(tǒng)ELISA檢測(cè)僅用一種抗原包被的蛋白只能捕獲非常有限的免疫學(xué)反應(yīng)信息。但借助適用于全自動(dòng)Western（Jess/Wes）的SARS-CoV-2多抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑盒，可以同時(shí)分析COVID-19中常見的多達(dá)5種不同抗原在人血清或血漿樣品中的IgG反應(yīng)性。這使得能夠?qū)�體液反應(yīng)進(jìn)行更深入的分析，并且揭示了血清反應(yīng)性之間的差異，而這種差異是傳統(tǒng)ELISA試劑盒無(wú)法獲取的。

參考文獻(xiàn)：

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3. A panel of human neutralizing mAbs targeting SARS-CoV-2 spike at multiple epitopes, T Noy-Porat, E Makdasi, R Alcalay, A Mechaly, Y Levy, A Bercovich-Kinori, A Zauberman, H Tamir, Y Yahalom-Ronen, M Israeli, E Epstein, H Achdout, S Melamed, T Chitlaru, S Weiss, et al., Nature Communications, 2020; 11(1):1–7.

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