CRISPR是繼RNA干擾技術(shù)、高通量測序技術(shù)等之后生物科學(xué)發(fā)展歷史上最具顛覆性技術(shù)之一，使用高效、迅速且簡單，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域及臨床實(shí)踐中引起一場巨變。經(jīng)過近幾年的發(fā)展，CRISPR不僅成為了生物醫(yī)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)研究技術(shù)，也已經(jīng)成功用于臨床治療和診斷，例如近期發(fā)表的啟動(dòng)于2016年的全世界第一個(gè)CRISPR基因編輯T細(xì)胞治療腫瘤的臨床實(shí)驗(yàn)證明安全可靠；此外，基于 CRISPR的快速診斷技術(shù)在最近爆發(fā)的冠狀病毒流感快速檢測中大放異彩。CRISPR技術(shù)正被越來越多的研究人員用來改造人類基因以消除疾病，創(chuàng)造生命力更加頑強(qiáng)的植物，消滅病原體等。在過去的7年中CRISPR技術(shù)斬獲了生命科學(xué)領(lǐng)域各種重量級(jí)獎(jiǎng)項(xiàng)，包括生命科學(xué)突破獎(jiǎng)，蓋爾德納國際獎(jiǎng)等，《Science》年度突破、《Nature》年度人物均授予了CRISPR單堿基基因編輯技術(shù)的突破，2019年9月，北京大學(xué)鄧宏魁組完成世界首例基因編輯治療艾滋病和白血病，使CRISPR技術(shù)再一次成為生命科學(xué)的焦點(diǎn)。

CRISPR技術(shù)不僅能夠在不同物種中對(duì)特定的基因進(jìn)行敲除，敲入等，經(jīng)過改造后還能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因的表達(dá)或者沉默、對(duì)特定的基因進(jìn)行原位標(biāo)記、在細(xì)胞水平或體內(nèi)對(duì)單堿基進(jìn)行編輯（BE2，BE3，ABE等）、體外系統(tǒng)中用于病原微生物或者基因突變的檢測等（Sherlock、DETECTR）；此外，通過與慢病毒或AAV技術(shù)聯(lián)合可以輕松在全基因組水平進(jìn)行基因快速篩選，David Liu研究小組與2019年實(shí)現(xiàn)了無模板的基因敲入技術(shù)。

隨著研究的深入，CRISPR/Cas9系統(tǒng)的應(yīng)用更加便捷、高效，也更廣泛，目前該技術(shù)成功應(yīng)用于人類細(xì)胞、斑馬魚、小鼠以及細(xì)菌等基因組精確修飾，成為科研人員的強(qiáng)大工具，基于CRISPR臨床實(shí)驗(yàn)已經(jīng)取得初步成功。

為了讓更多的科研人員及時(shí)全面的掌握CRISPR最新技術(shù)，并應(yīng)用的相應(yīng)的領(lǐng)域研究中，結(jié)合近期新冠肺炎疫情影響，減少旅行或者接觸帶來的不必要風(fēng)險(xiǎn)，微旋基因?qū)⒂诮谂e辦CRISPR/Cas9基因編輯在線培訓(xùn)+云實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)班。其中理論部分采用在線授課模式，在兩天的時(shí)間內(nèi)帶領(lǐng)大家詳細(xì)了解基因編輯的發(fā)展歷史，技術(shù)原理，應(yīng)用案例（基因敲除、敲入、單堿基基因編輯、轉(zhuǎn)錄激活/沉默、全基因組篩選、基因檢測、基因標(biāo)記、無模板基因敲入等），并在線針對(duì)基因編輯不同應(yīng)用方向進(jìn)行實(shí)戰(zhàn)演練。云實(shí)驗(yàn)為可選部分在理論課程結(jié)束后采用同步直播方式進(jìn)行，確定參加云直播后會(huì)提前快遞寄送所需要的實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)儀器自備，課程當(dāng)天同步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
 

日期	時(shí)間	培訓(xùn)內(nèi)容	授課老師
第一天	9:00-11:30	理論講解： 一、基因編輯技術(shù)簡介（三代基因編輯工具） 1. ZFN 2.TALEN 3.CRISPR 二、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)原理 1. CRISPR/Cas9發(fā)現(xiàn)歷史 2. CRISPR/Cas9作用機(jī)制解析 3. CRISPR/Cas9系統(tǒng)改造策略	劉剛博士 2008年博士畢業(yè)于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院，從事腫瘤干細(xì)胞，細(xì)胞衰老，腫瘤轉(zhuǎn)移等細(xì)胞作用網(wǎng)絡(luò)和通路的研究，并作為骨干研究人員參加了973計(jì)劃項(xiàng)目、國家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目、在香港中文大學(xué)做為作為Postdoc和Research fellow，從事研究工作。先后Nature Genetics，cell research、PLOS one等期刊發(fā)表論文十余篇。
	13:00-17:00	理論講解： 一、sgRNA在線設(shè)計(jì)構(gòu)建實(shí)戰(zhàn)演練(1.靶基因序列查找2.sgRNA在線設(shè)計(jì)合成) 二、CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染策略: 1.生物轉(zhuǎn)染（慢病毒、腺相關(guān)病毒等） 2.物理轉(zhuǎn)染 （電轉(zhuǎn)核酸/RNP、顯微注射、基因槍） 3.化學(xué)轉(zhuǎn)染 （脂質(zhì)體、陽離子聚合物） 三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率檢測，脫靶檢測及解決策略 1、高保真Cas9（espCas9、Hifi-Cas9、Cluster1-Cas9）
第二天	9:00-11:30	理論講解： 一、CRISPR技術(shù)應(yīng)用解析 1.基因敲除（單基因敲除、多基因敲除、大片段刪除、多靶點(diǎn)sgRNA載體構(gòu)建策略） 2.基因敲入實(shí)戰(zhàn)演練（gRNA選擇、同源臂設(shè)計(jì)、導(dǎo)入，長片段導(dǎo)入策略/提高基因敲入效率策略，PITCh、HITI、CRISPR-轉(zhuǎn)座酶高效基因敲入系統(tǒng)） 3.CRISPR在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的應(yīng)用（轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄抑制系統(tǒng)） 4.CRISPR靶基因標(biāo)記定位 二、CRISPR案例解析 1.基因敲除在小鼠模型構(gòu)建、植物、細(xì)胞、細(xì)菌、真菌等中的應(yīng)用案例解析 2.基于CRISPR的全基因組基因敲除高通量篩選策略（文庫構(gòu)建，選擇，流程優(yōu)化等） 3.基于CRISPR的全基因組轉(zhuǎn)錄激活/抑制高通量篩選策略（文庫構(gòu)建，選擇，流程優(yōu)化等） 三、CRISPR/Cas9與基因沉默技術(shù)（siRNA、shRNA）系統(tǒng)比較。
	13:00-17:00	理論講解： 一、單堿基基因編輯技術(shù)簡介及在基因治療中的應(yīng)用 1.HF2-BE2 2.BE3系統(tǒng) 3.ABE系統(tǒng)4.單堿基基因編輯脫靶克服。 二、基因CRISPR的基因檢測系統(tǒng) 1、CRISPR-Cas12a系統(tǒng)介紹(DETECTR) 2、CRISPR-Cas13a系統(tǒng)介紹(SHERLOCK-多重病原菌檢測) 三、CRISPR/Cas9系統(tǒng)在腫瘤和遺傳病治療中應(yīng)用解析 1、CRISPR結(jié)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療腫瘤 2、單基因遺傳病治療（DMD、先天性黑朦、地中海貧血等） 3、CRISPR治療HIV-基因編輯嬰兒解析 4、CRISPR治療HIV炎性白血病病例解析 四、新一代無模板基因敲入系統(tǒng)解析 1、CRISPR Primer-editing 基因敲入原理及應(yīng)用

 

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容	培訓(xùn)內(nèi)容
sgRNA敲除載體構(gòu)建	1.靶基因序列查找
	2.sgRNA在線設(shè)計(jì)合成
	3.敲除載體選擇及線性化
	4. sgRNA連接，轉(zhuǎn)化等
敲除載體轉(zhuǎn)染及初步鑒定	1.敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
	2.轉(zhuǎn)染篩選及敲除效果鑒定
	3.單克隆鑒定

課程福利

所有參加培訓(xùn)的老師均可獲得：

1. 免費(fèi)贈(zèng)送基因編輯質(zhì)粒載體一份：可以用于哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌、斑馬魚、線蟲等，共62種。

2. 免費(fèi)贈(zèng)送sgRNA離線設(shè)計(jì)軟件（有基因組DNA序列即可設(shè)計(jì)�。�。

3. 分子生物學(xué)免費(fèi)軟件安裝包一套（snapgene，premier6，Graphpad6.01，億圖圖示專家-技術(shù)路線圖繪制，Endnote，F(xiàn)lowjo等）。

4. 免費(fèi)獲得價(jià)值99美元信號(hào)通路圖制作神器 Biomedical-PPT-Toolkit-Suite一套。

舉辦地點(diǎn)
騰訊會(huì)議

參加對(duì)象
從事醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、農(nóng)學(xué)等領(lǐng)域科研工作者和高校教師及研究生。

授課方式
理論講授和實(shí)際演練緊密結(jié)合。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
注冊費(fèi)：理論授課 3500元/人，2020年5月20號(hào)之前匯款報(bào)名可以優(yōu)惠至：3300元/人。實(shí)驗(yàn)操作課程需加800元/人，同一個(gè)單位三個(gè)人以上報(bào)名可以免費(fèi)構(gòu)建價(jià)值1500元的質(zhì)粒一個(gè)。

銀行匯款
北京微旋基因技術(shù)有限公司
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