德國BMG多功能酶標(biāo)儀新功能：高通量核酸定量方案

瀏覽次數(shù)：7197　發(fā)布日期：2018-10-25　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉(zhuǎn)載請注明出處

BMG多功能酶標(biāo)儀高通量核酸定量解決方案——簡化二代測序質(zhì)量管理

Ulrike Bönisch1, Laura Arrigoni, Diana Santacruz, Nadia Kress

1conceptual design, conduction of experiments, writing of application note

Deep Sequencing Facility, Max Planck Institute of Immunobiology and Epigenetics, Stübeweg 51, Freiburg, 79108, Germany

二代測序（NGS）高速發(fā)展應(yīng)用，在NGS流程中多個(gè)步驟都需進(jìn)行核酸定量對NGS樣本進(jìn)行質(zhì)量控制（QC），工作量巨大且要求結(jié)果精確，傳統(tǒng)核酸定量標(biāo)準(zhǔn)方法正面臨著巨大的挑戰(zhàn)。

核酸定量法主要分為光吸收檢測法和熒光檢測法。相對光吸收檢測法，熒光定量法憑借更高的檢測靈敏度（高于光吸收檢測法3個(gè)數(shù)量級(jí)），更高的檢測特異性（特異性識(shí)別雙鏈/單鏈DNA），目前已成為核酸快速精準(zhǔn)定量的首選方法。

針對雙鏈DNA進(jìn)行少樣品量熒光法核酸定量，一直以來常用的方法是：結(jié)合Qubit熒光檢測儀，使用Qubit熒光染料進(jìn)行定量。然而這種檢測方法，只能單樣品依次檢測，通量明顯受限，并且試劑耗材成本高，顯然無法滿足高通量的核酸定量檢測需求。

對此，德國BMG多功能酶標(biāo)儀結(jié)合Qubit核酸定量熒光染料光譜特征，在BMG熒光檢測酶標(biāo)儀中優(yōu)化完善光路檢測系統(tǒng)，使其核酸熒光定量線性度均可達(dá)到R2>0.9999，且均可支持超高靈敏度的核酸定量（線性檢測范圍50pg/μl-100ng/μl）。同時(shí)，BMG這些高性能檢測方案，均可在96/384孔板中實(shí)現(xiàn)，不僅突破了Qubit檢測通量低的限制，并大大降低了試劑耗材成本（Qubit 200μl檢測體系VS BMG 96孔板100μl檢測體系VS BMG 384孔板20μl檢測體系），為高通量，精準(zhǔn)，快速，高效，低成本的核酸定量提供了完美的解決方案。

下圖為BMG FLUOstar omega多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行DNA和RNA熒光定量檢測與Qubit熒光檢測儀檢測結(jié)果的比對，BMG FLUOstar omega多功能酶標(biāo)儀在提高檢測通量的基礎(chǔ)上同時(shí)還能對樣品進(jìn)行重復(fù)對照檢測，更加確保結(jié)果的準(zhǔn)確，也非常適合低濃度樣本的檢測。

下圖為FLUOstar omega和Qubit熒光檢測儀的RNA檢測靈敏度比對

目前，該解決方案已在國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室廣泛成熟應(yīng)用起來。如國內(nèi)NGS企業(yè)的典型代表-華大基因，目前已為其全部NGS合作實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)了三十多臺(tái)BMG多功能酶標(biāo)儀，建立了高通量核酸精準(zhǔn)定量的新標(biāo)準(zhǔn)。