日期

時間

培訓(xùn)內(nèi)容

授課老師

1月19日

9:30-20:00

培訓(xùn)報(bào)到

劉剛博士

2008年博士畢業(yè)于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院，從事腫瘤干細(xì)胞，細(xì)胞衰老，腫瘤轉(zhuǎn)移等細(xì)胞作用網(wǎng)絡(luò)和通路的研究，并作為骨干研究人員參加了973計(jì)劃項(xiàng)目、國家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目、在香港中文大學(xué)做為作為Postdoc和Research fellow，從事研究工作。先后Nature Genetics，cell research、PLOS one等期刊發(fā)表論文十余篇。

1月20日

9:00-11:30

理論講解：

一、基因編輯技術(shù)簡介

1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR

二、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)

1.guide RNA序列設(shè)計(jì)

2.靶基因序列查找

3.sgRNA在線設(shè)計(jì)、特異性分析和效率驗(yàn)證

4.不同物種sgRNA設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)操作：

一、CRISPR/Cas9基因表達(dá)載體克隆構(gòu)建

1.sgRNA設(shè)計(jì)合成

2.敲除載體選擇及線性化

3.sgRNA連接，轉(zhuǎn)化等

 

13:00-17:00

理論講解：

一、CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染策略

1.生物轉(zhuǎn)染 2.物理轉(zhuǎn)染 3.化學(xué)轉(zhuǎn)染 4.篩選策略選擇

二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，電轉(zhuǎn)，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，顯微注射等）

三、Crispr/Cas9轉(zhuǎn)染策略（植物，動物，原核生物）

四、CRISPR/Cas9病毒系統(tǒng)選擇

實(shí)驗(yàn)操作：CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞

1月21日

9:00-11:30

理論講解：

一、CRISPR技術(shù)應(yīng)用解析

1.基因敲除2.基因敲入3.CRISPR在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的應(yīng)用4.CRISPR靶基因標(biāo)記定位5.基因敲除小鼠模型構(gòu)建策略

二、CRISPR案例解析

1.基因敲除小鼠模型構(gòu)建2.植物基因敲除應(yīng)用3.細(xì)菌，真菌等基因敲除應(yīng)用

三、Cripr基因脫靶分析及解決方案

四、Crispr/Cas9與siRNA、shRNA

實(shí)驗(yàn)操作：

1.CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染后靶DNA檢測

2.靶基因修飾位點(diǎn)擴(kuò)增及鑒定

13:00-17:00

理論講解：

一、單堿基基因編輯技術(shù)

1.HF2-BE2 2.BE3系統(tǒng) 3.ABE系統(tǒng)。

二、CRISPR-Cpf1系統(tǒng)介紹

三、CRISPR-C2c2系統(tǒng)介紹

四、多靶點(diǎn)sgRNA載體構(gòu)建策略

五、Crispr/Cas9系統(tǒng)在腫瘤和遺傳病治療中應(yīng)用解析

實(shí)驗(yàn)操作：

1.       CRISPR基因敲除效果檢測