ITSE(胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒-乙醇胺) |
無血清培養(yǎng)基介紹 |
細胞和組織在體外能夠成功生長,有賴于培養(yǎng)方法的優(yōu)化,一般是試圖模擬體內(nèi)的生理條件。該技術(shù)的一個關(guān)鍵因素是培養(yǎng)基的選擇。培養(yǎng)基中通常需添加動物血清。血清是由諸多成分組成的高度復(fù)雜的混合物,這些成分包括生長因子、激素、微量元素以及粘附和伸展因子等,它們發(fā)揮著多種生物學(xué)活性。 血清中白蛋白的含量高,這有助于細胞狀態(tài)的維持,作用機制包括防止pH值波動、抑制蛋白酶活性和保護細胞免受剪切力的傷害等。盡管血清可以很好地維持細胞和組織的生長,但其作為培養(yǎng)基添加物具有明顯的缺點,如成本較高、貨源減少、實驗變異性大、可能影響下游操作和存在潛在的污染源和不利因素等。此外,人們對動物保護意識的提高也限制了血清的使用。 血清在細胞培養(yǎng)應(yīng)用中的這些缺點使得近些年在科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域,人們對無血清培養(yǎng)基的需求日益增大。 除了能夠克服血清的缺點,無血清培養(yǎng)基還具有兩個突出的優(yōu)點,即可針對特定的細胞類型配制專用的培養(yǎng)基,以及可精確地控制細胞的增殖和分化過程。
基礎(chǔ)的無血清培養(yǎng)基雖然營養(yǎng)豐富、可足量提供細胞所必須的營養(yǎng)成分,但通常還需要進一步添加特定的組分,如生長因子、脂肪酸、維生素和微量元素等。多年的實踐表明,對于大多數(shù)細胞的無血清培養(yǎng)基,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基(多為DMEM/F12)中必須額外添加ITS(胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒)。而對于某些細胞,在培養(yǎng)基中還必須要添加乙醇胺。 |
為什么選擇ITSE? |
選擇ITSE添加物而非通常所用的ITS的優(yōu)勢在于:用戶自己往往意識不到他們培養(yǎng)的細胞需要乙醇胺才能達到最佳的生長狀態(tài),使用ITSE添加物可保證所有類型的細胞均能得到充足的營養(yǎng)供應(yīng)。 |
ITSE介紹 |
胰島素(Insulin) 可促進細胞生長,調(diào)節(jié)細胞對葡萄糖、氨基酸和脂類的攝取和利用。胰島素也具有抵抗細胞凋亡的作用。在哺乳動物細胞的無血清培養(yǎng)時,重組胰島素的添加濃度遠高于其生理濃度,這樣胰島素除能與胰島素受體(Insulin Receptor, IR)結(jié)合,發(fā)揮代謝調(diào)節(jié)和抗凋亡作用外,還可通過激活胰島素樣生長因子(IGF-I)的受體,發(fā)揮促有絲分裂和抗凋亡作用,產(chǎn)生生長因子效應(yīng)。 轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin) 是血清中富含的一種糖蛋白,能與三價鐵離子可逆性結(jié)合。其在鐵離子的轉(zhuǎn)運和代謝中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,同時也是一種重要的胞外抗氧化劑。因此,轉(zhuǎn)鐵蛋白是無血清培養(yǎng)基必不可少的添加物。轉(zhuǎn)鐵蛋白最初是從血清中分離出來的,然而由于批間差大和安全性差等問題,重組的轉(zhuǎn)鐵蛋白被越來越廣泛地應(yīng)用。從各種表達系統(tǒng),包括植物中獲得的重組轉(zhuǎn)鐵蛋白均具有相似的活性。 硒(Selenium) 是一種微量元素,它是谷胱甘肽過氧化物酶、硫氧還蛋白還原酶和其他抗氧化物酶的關(guān)鍵組分。硒已被確認是無血清培養(yǎng)基的必須添加物。 乙醇胺(Ethanolamine) 是一種有機化合物,它既是伯胺也是伯醇,可作為磷脂合成的前體。乙醇胺在雜交瘤細胞的增殖中發(fā)揮著重要的作用,因而經(jīng)常添加到雜交瘤細胞的無血培養(yǎng)基中。乙醇胺也用于其它類型細胞的無血清培養(yǎng)。 |