昊諾斯第17期分享討論:研磨提取核酸、微生物

瀏覽次數(shù)：3969　發(fā)布日期：2016-12-5　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉(zhuǎn)載請注明出處

第17期分享討論：小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物（文末有彩蛋）

本周昊諾斯第17期組織研磨和樣品處理分享、討論，我們邀請到了實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所袁老師給大家分享，內(nèi)容是——小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物。

那接下來，就讓我們先睹為快，看看這個案例的情況。

實(shí)例1：加裂解液直接勻漿（使用Trizol提取組織RNA）

1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊；

2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆（一次性使用）；

3、先加入Trizol（不建議加入太多 Trizol，液體體積過大影響勻漿效果），蓋好管蓋，裝入鼎昊源TL2020組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)。

4、組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為2~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高，研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）；

5、再加入適量Trizol至總體積；

6、后面步驟按Trizol說明進(jìn)行。

實(shí)例2：先勻漿，再取一定量液體加裂解液進(jìn)行核酸抽提，本protocol適用提取小鼠組織中的病毒的核酸

1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊，樣品量較多時(shí)使用大離心管；

2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆，使用大離心管時(shí)，可以將氧化鋯珠數(shù)量增加；

3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水，總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好，蓋好管蓋，裝入鼎昊源TL2020組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)（研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）。

4、組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為1~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高），若研磨不充分，可以繼續(xù)研磨到充分為止；

5、一定溫度、轉(zhuǎn)速，離心數(shù)分鐘；

6、取上清液按照試劑盒說明書進(jìn)行后續(xù)提取步驟。

實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過一齊加1ml的Trizol，可能是體積過大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。

昊諾斯嘉賓：實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過一齊加1ml的Trizol，可能是體積過大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。

昊諾斯嘉賓：如果前面勻漿充分了，后面補(bǔ)齊裂解后不需要再研磨的，只需稍微混勻就可以。

用戶：可以選擇干磨嗎？就組織直接扔進(jìn)去弄成勻漿或者粉末，我再根據(jù)需要加trizol或者蛋白裂解液

昊諾斯嘉賓：跟大家分享下，我們最近用組織研磨儀用于抗原加佐劑的乳化，效果還不錯。一機(jī)兩用。

昊諾斯嘉賓：組織干磨效果不好，需要加入適量的液體，沒有液體很多組織掛在壁上。

用戶：提取下的核酸用途是什么？這個是我最關(guān)心的。

昊諾斯嘉賓：我們用于病原微生物檢測。

用戶：怎么個檢測法您能給我簡單介紹一下嗎？

昊諾斯嘉賓：所以我們用的最多的是實(shí)驗(yàn)2，先勻漿，破碎組織，釋放組織細(xì)胞中的病毒，。

昊諾斯嘉賓：主要采用PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測。

用戶：嗯，PCR，我知道了，謝謝。

昊諾斯嘉賓：不客氣。一般的組織核酸抽提試劑盒中，都會有一部勻漿的步驟。

昊諾斯嘉賓：以前沒有研磨儀的時(shí)候都是用研缽手工勻漿，一天幾十上百個樣品，累成狗。

用戶：研磨如果用液氮處理，里面的液體不會凍住嗎？

用戶：我也有這個疑問，看來這個儀器是核酸分析必須的。

昊諾斯嘉賓：開始會凍住，等研磨到一定時(shí)間就自然解凍了，我們處理時(shí)只是讓它預(yù)冷一下，最好不要凍住。所以一般是放在-80度冰箱稍預(yù)冷一下就可以了

用戶：嗯！

用戶：謝謝

昊諾斯嘉賓：是的，核酸檢測必備。

用戶：早些天我看一個打沙棘的視頻，凍掉以后，直接就打下來了，所以冷凍還是有效果的，原理是一樣的。

昊諾斯嘉賓：還要講一下，選質(zhì)量好的EP管，現(xiàn)在一些國產(chǎn)的EP管質(zhì)量太差，蓋不嚴(yán)，導(dǎo)致液體漏出。如果預(yù)冷的話，一些EP管就可能被打碎了，我們有過這樣的例子。

用戶：我們也因?yàn)橘|(zhì)量不好的EP管影響過實(shí)驗(yàn)，所以試劑耗材也很重要。

昊諾斯嘉賓：同意。

用戶：一定要選擇質(zhì)量有保證的產(chǎn)品。

昊諾斯嘉賓：是啊。關(guān)于振動頻率說明一下，我們選的頻率比較高，我看到有的資料上講一般動物樣品如大腦、心臟、肺、胃、肝臟等無骨骼組織的研磨推薦頻率是1000-1100r/min研磨時(shí)間是1-2min，具體的頻率可根據(jù)樣品材料及數(shù)量的不同，做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。過大的頻率或者時(shí)間都可能會導(dǎo)致部分DNA的斷裂，建議每次研磨時(shí)間在1mm左右，中間停頓一會，重復(fù)2-3次。

用戶：謝謝袁老師。

最后，讓我們共同期待第18期“組織研磨和樣品處理分享、討論”活動吧！下期，我們不見不散！

溫馨提示

我們的“組織研磨和樣品處理分享、討論”活動是在【昊諾斯鼎昊源組織研磨分享】微信群內(nèi)開展的！如果您也想?yún)⑴c我們的活動，那么就掃描下方二維碼，關(guān)注昊諾斯，回復(fù)“加群”，群主則會拉您進(jìn)群。

本群的目的是希望可以給大家提供一個樣品處理問題的交流平臺，有什么相關(guān)問題在群里能夠分享和提問答疑……另外我們還能通過這個平臺連接用戶使用人員和工廠研發(fā)人員，看看在這些討論過程中是否會碰撞出火花來，以為實(shí)驗(yàn)室手工的樣品處理做出更多更好的自動化的輔助工具或替代儀器備來，更可以為完善我們現(xiàn)有產(chǎn)品的設(shè)計(jì)打開思路提出建議……