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Nature子刊發(fā)表單個(gè)外泌體高通量多參數(shù)分析重磅文章

瀏覽次數(shù):3669 發(fā)布日期:2016-11-17  來源:本站 本站原創(chuàng),轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處
 
越來越多的研究揭示外泌體參與幾乎所有的生理代謝過程,尤其在重大疾病的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色,使其在臨床診斷和治療方面展現(xiàn)出了極具前景的研究?jī)r(jià)值。目前外泌體的檢測(cè)方法主要有掃描電子顯微鏡、納米微粒追蹤分析術(shù)(NTA)、ELISA和流式分析法等,由于通量高、用時(shí)短、操作簡(jiǎn)單,ELISA和流式分析法是比較常用的方法。ELISA方法容易受其他可溶性抗原的干擾,而且無法知道外泌體的大小、數(shù)量等信息;流式分析法不僅可以檢測(cè)外泌體的大小、數(shù)量,而且通過特異的熒光標(biāo)記可以檢測(cè)外泌體的來源,將外泌體進(jìn)行分類,因此,流式分析法理論上是進(jìn)行外泌體快速、高通量、多參數(shù)檢測(cè)的最優(yōu)選擇。
 
近日來自美國(guó)凱斯西儲(chǔ)大學(xué)的科學(xué)家,成功摸索出一種更適合單個(gè)外泌體快速高通量分析的超靈敏納米流式分析法。研究人員充分考慮到流式分析法易于實(shí)現(xiàn)快速高通量的優(yōu)點(diǎn)以及傳統(tǒng)流式分析外泌體的限制(檢測(cè)下限200-500nm的散射光靈敏度不適合檢測(cè)30-150nm的外泌體;熒光標(biāo)記檢測(cè)背景噪音高;依賴于抗體微珠的外泌體檢測(cè)法無法分析外泌體絕對(duì)數(shù)量以及單個(gè)外泌體表型),通過借助超靈敏納米流式分析儀Apogee A50 Micro,克服以上限制因素,完美地實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞系上清和人體組織外泌體的高通量多參數(shù)快速分析檢測(cè):不僅能夠利用Apogee A50 Micro超靈敏的散射光分辨率檢測(cè)到100nm左右的外泌體,同時(shí)也利用其極佳的熒光檢測(cè)靈敏度完成單個(gè)外泌體的表面蛋白分析。這種高通量單個(gè)外泌體多參數(shù)納米流式分析法,已為樹立外泌體檢測(cè)新趨勢(shì)奠定了基礎(chǔ),將為相關(guān)研究人員帶來極大的便利,也必將對(duì)重大疾病外泌體標(biāo)記物的發(fā)掘過程做出卓越的貢獻(xiàn)。
 
伯齊科技近年把Apogee納米流式引入國(guó)內(nèi),北京、上海的重點(diǎn)單位先后購(gòu)入該系統(tǒng)以作外泌體、微生物和納米材料等微顆粒應(yīng)用。
 
 
圖1,超靈敏納米流式Apogee A50 Micro檢測(cè)外泌體
無熒光標(biāo)記的外泌體散射光強(qiáng)度,與100nm的二氧化硅微球散射強(qiáng)度相當(dāng),提示Apogee A50 Micro僅利用散射光即可檢測(cè)到大小約100nm的單個(gè)外泌體。
 
圖2,MDA-MB-231和 MCF-12A細(xì)胞源性外泌體檢測(cè)
利用圖1的檢測(cè)參數(shù)設(shè)置,結(jié)合CD44熒光標(biāo)記,分析MDA-MB-231和 MCF-12A細(xì)胞系CD44表達(dá)陽(yáng)性外泌體的豐度差異。
 
圖3,超靈敏納米流式Apogee A50 Micro檢測(cè)人體血液外泌體
利用圖1的檢測(cè)參數(shù)設(shè)置,結(jié)合CD47熒光標(biāo)記,分析人體血液中與乳腺癌相關(guān)的CD47表達(dá)陽(yáng)性外泌體。
 

參考文獻(xiàn):

Kibria G, Ramos EK, Lee KE, et al. A rapid, automated surface protein profiling of single circulating exosomes in human blood.[J]. Scientific reports, 2016, 6.

 
Apogee超靈敏納米流式分析儀簡(jiǎn)介:

超靈敏納米流式分析儀是英國(guó)Apogee Flow廠家研發(fā),它獨(dú)有的專行光學(xué)設(shè)計(jì)使其可檢測(cè)最小80nm的小顆粒,并擁有10nm的分辨率,使其成為市場(chǎng)上唯一可檢測(cè)小于100nm大小顆粒的流式細(xì)胞儀。英國(guó)Apogee Flow的技術(shù)早前廣泛為美國(guó)軍方用于戰(zhàn)場(chǎng)上的快速微生物檢測(cè)。繼之前北京中科院微生物所和北京計(jì)量研究所引入了Apogee超靈敏納米流式分析儀為微生物作快速流式檢測(cè)和定量,最近上海第二軍醫(yī)大學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心的老師也選購(gòu)了Apogee最新的A50-Micro Plus型號(hào)來進(jìn)行外泌體等微顆粒研究的科研工作。而每年在美國(guó)舉行的國(guó)際胞外囊泡大會(huì)上,更有不少的科學(xué)家的研究中采用了Apogee超靈敏納米流式分析儀來作胞外囊泡研究。由此可見這種新技術(shù)在小顆粒檢測(cè)中確是帶來不少優(yōu)勢(shì)。
 
 
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