BMG公司CLARIOstar多功能酶標(biāo)系統(tǒng)優(yōu)化PicoGreen核酸定量法

      對(duì)核酸樣品的定量是任何基于和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室最基本的需求。除了大家熟知的傳統(tǒng)260 /280紫外吸收分析法外，還有很多基于熒光分析的DNA定量方法。這類熒光定量法不僅靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于光吸收法，它們還可以針對(duì)雙鏈DNA進(jìn)行定量。在市場(chǎng)上比較有名的就是Life Technology公司的PicoGreen試劑，它是可跟雙鏈核酸結(jié)合的特異性熒光探針。在很多對(duì)核酸濃度要求比較高的實(shí)驗(yàn)中，如二代測(cè)序，經(jīng)常會(huì)用到這種熒光定量方法。
      除了分析靈敏度以及特異性，通量以及微量分析體積也是現(xiàn)有用戶經(jīng)常面對(duì)的問(wèn)題。雖然市面上也有熒光定量?jī)x去配合PicoGreen試劑，但每次只能做一個(gè)樣本。對(duì)于很多服務(wù)性企業(yè)，特別是測(cè)序服務(wù)商，每天面對(duì)幾百個(gè)樣本，在核酸定量這一環(huán)就要花大半天去完成，費(fèi)時(shí)失事。所以市場(chǎng)上非常渴望高通量、低反應(yīng)體積和高準(zhǔn)確度的核酸定量方案。然而，這種新需求對(duì)檢測(cè)設(shè)備的要求非常之高。針對(duì)這種需求，德國(guó)專業(yè)酶標(biāo)儀生產(chǎn)公司BMG LABTECH推出了基于獨(dú)特的LVF光柵的CLARIOstar多功能酶標(biāo)儀，并在該系統(tǒng)上優(yōu)化了 PicoGreen核酸定量方法，是高靈敏度、高特異性、高通量、微體積樣品核酸定量的最優(yōu)解決方案。
      該優(yōu)化方案分別對(duì)BMG公司生產(chǎn)的LVis微量板（2μL體系）、市面上常見的96孔板和384孔板分別進(jìn)行了測(cè)試和優(yōu)化，并對(duì)比了基于CLARIOstar特有的LVF光柵以及優(yōu)化濾光片兩種濾光系統(tǒng)的結(jié)果，進(jìn)一步驗(yàn)證該方案的優(yōu)越性（圖1，2和3）。
      所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)充分說(shuō)明，使用CLARIOstar多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行PicoGreen核酸定量，在超大濃度梯度范圍內(nèi)都有非常好的檢測(cè)靈敏度和線性度。CLARIOstar獨(dú)特的LVF光柵具備了與濾光片基本相同的高性能 。例如，在384孔板在，無(wú)論是采用濾光片或是采用LVF光柵，其檢測(cè)最低極限都可以低至3pg/孔。采用基于CLARIOstar多功能酶標(biāo)儀的PicoGreen核酸定量法，可以進(jìn)行任意體積核酸樣品的精確定量——最低2μL到384孔或96孔的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)體積。事實(shí)上BMG酶標(biāo)儀的高靈敏度和穩(wěn)定性已廣泛得到國(guó)內(nèi)用戶認(rèn)可，其中國(guó)內(nèi)測(cè)序服務(wù)龍頭—華大基因（BGI），已先后添置十多臺(tái)BMG系統(tǒng)進(jìn)行核酸定量檢測(cè)，充分說(shuō)明BMG LABTECH多功能酶標(biāo)儀在高通量核酸定量的優(yōu)越性與可靠性。

圖1：96孔板PicoGreen分析法，采用濾光片（紅色）以及LVF光柵（藍(lán)色）的結(jié)果對(duì)比圖，樣品體積200μL,整個(gè)檢測(cè)DNA濃度范圍內(nèi)都有非常好的線性度：濾光片：R2 = 0.9999，LVF光柵：R2 = 0.9998

圖2：384孔板PicoGreen分析法，采用濾光片（紅色）以及LVF光柵（藍(lán)色）的結(jié)果對(duì)比圖，樣品體積20μL，整個(gè)檢測(cè)DNA濃度范圍內(nèi)都有非常好的線性度：濾光片：R2 = 0.9999，LVF光柵：R2 = 0.9998

圖3： LVis微量板PicoGreen分析法，采用濾光片（紅色）和LVF光柵（藍(lán)色）的結(jié)果對(duì)比圖，樣品體積2μL

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