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昊諾斯第十期“組織研磨和樣品處理分享、討論”

瀏覽次數(shù)：5068　發(fā)布日期：2016-7-27　來源：本站　本站原創(chuàng)，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處

【干貨分享】昊諾斯第十期“組織研磨和樣品處理分享、討論”

這一期我們有幸請(qǐng)到了昊諾斯老用戶呂博士，給大家做實(shí)驗(yàn)室樣品處理分享。

呂博士實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)豐富，在樣品處理方面有很多心得，在本期的組織研磨和樣品處理分享、討論中給大家?guī)砹朔浅＞实姆窒�，并受到了大家的一致贊賞，其他老師們也都熱情高漲，積極參與組織研磨和樣品處理分享、討論。

那接下來，就讓我們一看究竟吧！

昊諾斯嘉賓：怎么分享呢？就是用那個(gè)組織研磨儀，DNA、RNA都做過，感覺整體效率肯定是上去了，質(zhì)量也不錯(cuò)吧，大家有啥問題，提問，然后我來針對(duì)性地說一下我的使用感受吧。

昊諾斯嘉賓：簡(jiǎn)單說來，就是一個(gè)2ml離心管里面，放大小兩個(gè)鋼珠，然后把樣放進(jìn)去，根據(jù)樣的情況決定是否剪碎，然后放到液氮里面凍到不起泡，小心放到組織研磨儀帶的槽子里面，盡量對(duì)稱，然后打磨1-2min，根據(jù)樣的情況，決定是否再次在液氮里面凍，然后是否再次打樣。

用戶：提取RNA用的是什么產(chǎn)品？

昊諾斯嘉賓：什么意思？

用戶：用Trizol還是商業(yè)化試劑盒？

昊諾斯嘉賓：就是三無的好一點(diǎn)的離心管，然后Trizol，鋼珠用全新的，然后在無水乙醇里面泡，然后150度烘箱1-2小時(shí)，RNA稍微小心點(diǎn)，我們的效果還是不錯(cuò)的，沒有想象中的那么難弄。一般我們RNA提取加純化差不多一次40-80個(gè)樣吧，除了前面鋼珠和離心管要求高點(diǎn)，其他的和DNA差不多。

用戶：呂老師您主要做的是什么樣品呢？

昊諾斯嘉賓：我們做植物，小麥。小麥嫩葉不用剪，直接一段放進(jìn)去就可以，地里采集的老葉子盡量能夠剪一下。

用戶：不用液氮可以不？

昊諾斯嘉賓：老葉子纖維比較多且粗壯，不用液氮貌似不行吧，目前我還不清楚不用液氮的方法。如果不用液氮估計(jì)會(huì)被組織研磨儀打磨成樣泥……，這個(gè)可以咨詢下鼎昊源的技術(shù)。

用戶：液氮效果好。

昊諾斯嘉賓：還有自動(dòng)凝膠染色的問題我也可以和大家分享，尤其是RNA，用液氮可以盡量防止RNase的作用，或許也可以Trizol加進(jìn)去，不用液氮也可以吧，不過我沒那么做過。

用戶：液氮升華水分。

昊諾斯嘉賓：關(guān)于鋼珠的問題，我個(gè)人感覺一大一小最好，兩個(gè)大的如果轉(zhuǎn)數(shù)調(diào)整不當(dāng)，管子質(zhì)量不好容易把管子打裂。

用戶：我想問下大家是用液氮凍下，組織研磨儀研磨后的研磨粉末再浸提嗎？

昊諾斯嘉賓：我的程序是DNA，管子先放鋼珠，然后放樣，然后蓋蓋，然后液氮凍，然后快速拿出放到槽子里，打樣，根據(jù)樣的情況和自己設(shè)定的轉(zhuǎn)速第一次打磨時(shí)間可以決定是否進(jìn)行再次凍再次打。個(gè)人建議一批樣品凍兩次打兩次，每次差不多1min半，我們小麥老葉子效果不錯(cuò)，就是轉(zhuǎn)槽子的內(nèi)徑里面的個(gè)別樣可能打的不好，畢竟應(yīng)該是里面離心力小點(diǎn)，然后挑出來再次打樣就OK了。

昊諾斯嘉賓：大家都還有啥問題，互相交流下……

用戶：打老葉子的時(shí)候您組織研磨儀一般調(diào)多大的轉(zhuǎn)速呢？

昊諾斯嘉賓：組織研磨儀轉(zhuǎn)速1500吧，這個(gè)還要根據(jù)管子的質(zhì)量來。

用戶：管子質(zhì)量好點(diǎn)的可以提升組織研磨儀轉(zhuǎn)速是嗎？

昊諾斯嘉賓：DNA用的韌性好的一般的管子，組織研磨儀轉(zhuǎn)速高，RNA用的韌性稍微差點(diǎn)的三無管子，組織研磨儀轉(zhuǎn)數(shù)低，組織研磨儀轉(zhuǎn)數(shù)和時(shí)間應(yīng)該在一定程度上成反比吧，還有鋼珠的大小，兩個(gè)小鋼珠時(shí)間長(zhǎng)，組織研磨儀轉(zhuǎn)數(shù)可以適當(dāng)提高，兩個(gè)大鋼珠所需時(shí)間短，組織研磨儀轉(zhuǎn)速不要太高，一般我RNA應(yīng)該是QSP的管子，不知道哪個(gè)批次，組織研磨儀用的是1000轉(zhuǎn)吧。

昊諾斯嘉賓：有一次組織研磨儀用轉(zhuǎn)速高了打裂了，樣廢了，之后組織研磨儀就不敢用高轉(zhuǎn)速了，寧愿延長(zhǎng)點(diǎn)時(shí)間。

昊諾斯嘉賓：對(duì)啦，我不是老師哈，現(xiàn)在博士在讀……大家互相交流。

昊諾斯嘉賓：我們的組織研磨儀買了好幾年了，不知道現(xiàn)在的有沒有控溫的，如果有控溫的組織研磨儀效果應(yīng)該會(huì)更好。

用戶：我們實(shí)驗(yàn)室有個(gè)新的組織研磨儀，管子沒有配套，還沒有使用，植物用手磨。

昊諾斯嘉賓：無所謂吧，我們的管子就是用普通2ml的EP管呀。

用戶：控溫的組織研磨儀最低達(dá)多少度？

昊諾斯嘉賓：控溫的組織研磨儀也不可能達(dá)到液氮的溫度吧，我的意思是如果有個(gè)控溫的組織研磨儀，能夠保持在0度以下就好，然后這樣一次就可以打樣時(shí)間長(zhǎng)點(diǎn)。

用戶：是的。

用戶：嗯，確實(shí)不錯(cuò)，我上次做的感覺有抑制劑，PCR效果不行。

用戶：組織研磨儀周圍放上冰袋，是不是能適度降降溫？

用戶：是因?yàn)槌匮心サ牟唬?/SPAN>

用戶：植物葉片相對(duì)好研磨。

用戶：見過吹液氮冷卻的，能達(dá)到-20/30。

用戶：冰浴。

昊諾斯嘉賓：動(dòng)物組織適當(dāng)剪碎。

昊諾斯：控溫功能的組織研磨儀機(jī)型正在研制中，等出來了給你試用，怎么樣呂老師。

用戶：溫度過低的話對(duì)組織研磨儀不會(huì)有影響么？

昊諾斯嘉賓：肯定會(huì)。

用戶：有這個(gè)必要。

昊諾斯嘉賓：所以我建議組織研磨儀溫度能夠控制在0度之下即可。

用戶：溫度對(duì)效果的影響還是很大的。

昊諾斯嘉賓：畢竟金屬在很低溫度下應(yīng)該相對(duì)強(qiáng)度會(huì)降低吧。

用戶：我們是用冰袋。

用戶：嗯，我們實(shí)驗(yàn)室一般也都用冰袋降溫。

用戶：固體二氧化碳更好吧。

用戶：成本高點(diǎn)。

昊諾斯嘉賓：液氮凍過，然后一次打樣時(shí)間不要太長(zhǎng)，讓樣品處于沒有溶的狀態(tài)效果也可以呀。

昊諾斯嘉賓：之所以說控溫，是嫌重復(fù)在液氮中凍麻煩，目前我們做實(shí)驗(yàn)還沒有影響效果的。

用戶：液氮一定要干嘛，液氮凍的不能有液體，樣品沒有溶。

昊諾斯嘉賓：溫控應(yīng)該能夠提高打樣效率。

用戶：干冰沒用過，話說干冰是不是很貴？

昊諾斯嘉賓：最遲樣品不要有水。

用戶：有液體也升華了。

昊諾斯嘉賓：你是什么樣品呢？有液體會(huì)凍住，然后很難打好，經(jīng)驗(yàn)是這樣。

用戶：植物葉片。

昊諾斯嘉賓：如果里面有液氮沒關(guān)系。

用戶：嗯，樣品要清洗。

昊諾斯嘉賓：不要有水，樣品也不要堆地太緊。

昊諾斯嘉賓：我們有時(shí)樣品先放在-80，取出剪樣的時(shí)候會(huì)有一點(diǎn)水，但是好像沒影響效果吧。

用戶：是專門的液氮罐里存放嗎？

昊諾斯嘉賓：沒有呀，直接放到-80冰箱里了。

用戶：我們冰箱一般只設(shè)18零下。

昊諾斯嘉賓：有專門的-80冰箱，普通冰箱是-20吧，具體這個(gè)我也不是很清楚。

用戶：您一般是提取小麥葉片酶嗎？

昊諾斯嘉賓：DNA、RNA。

用戶：什么是剪樣？

用戶：葉片用剪刀剪碎。

昊諾斯嘉賓：比如小麥葉片，稍微剪碎一下。

用戶：哦，是這樣的啊。

用戶：如果沒在-80存放會(huì)不會(huì)影響植物DNA提取，就是樣品吧。

用戶：可不可以用普通的粉碎機(jī)先粉碎啊？

用戶：植物DNA提取需要新鮮樣嗎？

用戶：我覺得如果是提dna應(yīng)該問題不大，但如果是提rna就必須用液氮。

用戶：樣品多的話粉碎，不多就剪下就好。

用戶：但如果是提取rna的話，普通研磨儀可以嗎？

昊諾斯嘉賓：可以呀，反正我的是這樣。

用戶：rna提取條件更為嚴(yán)格？

用戶：dna和rna的提取有什么不同嗎？

昊諾斯嘉賓：RNA操作要嚴(yán)格些。

用戶：rna酶存在較多，rna易降解。

用戶：需要查下資料看看怎么提取，我們目前提取一些酶。

用戶：所以我們一般rna提取時(shí)樣品都要用液氮。

用戶：保證酶不失活？

用戶：對(duì)。

用戶：而且二者會(huì)不會(huì)產(chǎn)生干擾��？

用戶：這里吐槽一下：每次從-80冰箱里找樣本都得在一大堆東西里翻半天，#公用設(shè)施的天然缺點(diǎn)#。

用戶：實(shí)驗(yàn)室的管理，人多嘛用的東西多，有時(shí)自己需要的也要找好久。

用戶：總有人不按套路來。

用戶：這也正常，大家互相監(jiān)督理解。

用戶：每打一次樣品是不是換鋼珠或清洗，大批量的植物研磨呂老師有什么建議嗎？

昊諾斯嘉賓：我們實(shí)驗(yàn)室每次提RNA用新鋼珠，DNA鋼珠重復(fù)用，用稀乙酸先洗一遍，然后用無水乙醇一泡，然后晾干……DNA我們每次最少都是2.300個(gè)，最多一天三個(gè)人提過大于800吧，RNA一般一天提幾十個(gè)吧，包括純化，一般一個(gè)人或者兩個(gè)人，RNA盡量各個(gè)環(huán)節(jié)都少點(diǎn)引入污染的可能。

用戶：感謝分享！

昊諾斯：謝謝呂博士！

用戶：謝謝！

用戶：謝謝分享！

最后，再次感謝昊諾斯特邀嘉賓呂博士的精彩分享，讓大家都頗有收獲。讓我們共同期待第十一期“組織研磨和樣品處理分享、討論”活動(dòng)吧！下期，我們不見不散！

溫馨提示：

我們的“組織研磨和樣品處理分享、討論”活動(dòng)是在【昊諾斯鼎昊源組織研磨分享】微信群內(nèi)開展的！如果您也想?yún)⑴c我們的活動(dòng)，那么就找昊諾斯銷售工程師拉您進(jìn)群，或者回復(fù)昊諾斯微信公眾號(hào)申請(qǐng)進(jìn)群（申請(qǐng)時(shí)要注明所在單位名稱+微信號(hào)）。

此外，本群的目的是希望可以給大家提供一個(gè)樣品處理問題的交流平臺(tái)，有什么相關(guān)問題在群里能夠分享和提問答疑……另外我們還能通過這個(gè)平臺(tái)連接用戶使用人員和工廠研發(fā)人員，看看在這些討論過程中是否會(huì)碰撞出火花來，以為實(shí)驗(yàn)室手工的樣品處理做出更多更好的自動(dòng)化的輔助工具或替代儀器備來，更可以為完善我們現(xiàn)有產(chǎn)品的設(shè)計(jì)打開思路提出建議……

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