【干貨分享】昊諾斯第九期“組織研磨和樣品處理分享、討論”
這一期我們?yōu)榇蠹姨峁┑陌咐恰笆衿ぱ心ヌ崛NA”:
實驗:石榴皮研磨提取RNA
實驗地點:武漢某生物公司
試驗樣品:石榴皮樣品
1、將石榴皮剪成小碎塊凍存,實驗時取出放入圓底離心管,單管放入體積不超過離心管體積的1/3;
2、在離心管中加入硬質不銹鋼研磨珠,蓋好管蓋,與適配器一起放入液氮然后取出;
3、將取出后的適配器安裝在TL2010S中通量組織研磨儀上,參數(shù)設置為一定轉速,研磨一定時間。
在昊諾斯銷售工程師對以上案例簡單講解之后,用戶們在“昊諾斯鼎昊源組織研磨分享”群內進行了熱烈的分享、討論:
用戶:石榴皮含有果膠吧?
昊諾斯:應該含有少量果膠,其實石榴皮也算是植物樣品中的一類。
用戶:果膠纖維素的存在對檢測過程有影響嗎?
昊諾斯:研磨的方法與研磨葉片相同。
用戶:我看看。
昊諾斯:應該不會有影響,現(xiàn)在的RNA提取試劑還是挺成熟的。
用戶:時間不一樣吧。
昊諾斯:您是說研磨時間?
用戶:嗯,知道了,還有提取試劑存在。
昊諾斯:石榴皮凍過液氮以后還是很好研磨的。
用戶:前面的負八十有必要嗎?后面直接液氮了?
昊諾斯:前面的-80是保存樣品。
用戶:前面的負八十有必要嗎?后面直接液氮了?我也有同樣的疑問。
用戶:負八十是為了降低空氣體積吧,免得液氮時爆開。
昊諾斯:這個使用的客戶也是服務公司,樣品都是別的客戶提供的。
昊諾斯:也有這方面的原因。
用戶:液氮的溫度是多少度?
用戶:我想問管和鋼珠需要depc水處理嗎?
昊諾斯:負一百九十多。
用戶:這個是必須的吧,196。
昊諾斯:如果提取的是RNA,是必須處理的。
用戶:那我想問問有沒有替代離心管的適配器?我一用就裂管。
用戶:換管子材料吧,能禁得起冷凍的。
用戶:你們用哪一種牌子的?
昊諾斯:我們的經驗是選用圓底2ml離心管,減少液氮冷凍時間,縮短組織研磨儀研磨時間,或者換個牌子的離心管。
用戶:我都試過了,就在組織研磨儀研磨后發(fā)現(xiàn)裂了,所以想問問你們用什么牌子。
昊諾斯:哪位老師用的管效果還可以,可以介紹一下。
用戶:我們用的一直都不錯,也出現(xiàn)過裂管。
昊諾斯:據用戶說這款的不錯。
昊諾斯:還有eppendorf的。
用戶:進口的?無須滅酶了?
用戶:然后就調低組織研磨儀轉速1000吧,延長打樣時間。
昊諾斯:進口的,第一個是Thermo的。
用戶:其實我個人覺得RNA也沒有想象的那么恐怖。
用戶:哦哦,謝啦。
用戶:三無的管子。
用戶:裂管是因為溫差變化太大么?
用戶:就是不清楚。
用戶:有個疑問啊,DNA和RNA能實現(xiàn)分離嗎?
用戶:鋼珠用酒精泡泡,提的RNA就OK。
用戶:組織研磨儀能否控溫?
昊諾斯:現(xiàn)在好像有種提取液可以實現(xiàn)。
用戶:管子裂是因為液氮下塑料變得脆了,然后高速鋼珠一沖撞就裂了。
用戶:為什么要分離呢?樣品很珍貴?
用戶:您的意思是先提取DNA,然后繼續(xù)利用提取完的原材料來提取RNA?
用戶:塑料材質達不到低溫保護。
用戶:提完分別用對應的酶處理這樣技能保證量也能保證質。
用戶:不是,我的意思是兩者有沒有分離干擾?
用戶:用trizol說明書上說是可以DNA和RNA分離。
昊諾斯:應該是沒有,之前我問過一個客戶,用組織研磨儀研磨一次,用特定的提取液,可以同時提取DNA和RNA。
用戶:同一樣品可以同時提取。
用戶:提 RNA不如DNa省事。
用戶:我們打樣裂過后采取的措施第一減低組織研磨儀轉速,打樣后然后再凍再打,延長打樣時間;二把樣品分裝兩管打樣后加上TRIZON再合并。
用戶:嗯,看來提取劑的選擇性已經非常高了。
昊諾斯:您可以先降低下組織研磨儀研磨速度,比如1900轉或者1800轉,試下。
用戶:我用的是1700。
用戶:速度關系不大,是溫度導致的。
用戶:那如何是好?
用戶:只能換管子材料。
昊諾斯:嗯嗯,就像呂老師說的,可以研磨比如30s,取出后再凍液氮,然后再磨,少量多次。
用戶:國外進口的不知道現(xiàn)在怎樣,之前也碎過好幾個,把老板心疼壞了。
昊諾斯:進口的應該效果會好一點,畢竟國內的良莠不齊。
用戶:當時還不是研磨,只是離心。
用戶:有個疑問:離心管有金屬材料的么?
用戶:感覺應該有,但沒見過。
昊諾斯:我們有5ml不銹鋼的研磨管。
用戶:容積大的我們也有,但是1.5的沒見過。
用戶:304材質的可以,耐低溫和高溫。
用戶:不銹鋼的成本太高吧,會不會引進交叉污染?
用戶:但是不銹鋼的可以重復使用呀,滅菌即可。
昊諾斯:清洗消毒干凈,應該不會交叉污染。
用戶:304的很耐操的。
昊諾斯:304很耐腐蝕。
昊諾斯:蓋是什么材質的?
用戶:標配是聚乙烯,可選配硅橡膠。
用戶:應該挺成熟了。
用戶:現(xiàn)在可以適配上這個機器嗎?
昊諾斯:看介紹和2ml離心管的尺寸一樣,應該可以。
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