人巨細胞病毒( human cytomegalovirus HCMV) 是皰疹病毒科 β 屬dsDNA病毒。HCMV在人群中的感染非常普遍，感染患者免疫功能正常時一般無明顯臨床癥狀。然而當免疫功能受抑制時，如在艾滋病患者，器官移植患者以及嬰幼兒體內(nèi)，HCMV會引發(fā)嚴重癥狀甚至導(dǎo)致死亡。同時，HCMV是人類先天性感染最常見的病毒之一, 對孕婦及胎兒危害較大, 常造成流產(chǎn)、死胎、胎兒畸形、發(fā)育遲緩、聽力障礙、神經(jīng)系統(tǒng)遲緩等。目前針對HCMV尚無有效治療手段，因此研發(fā)特異性預(yù)防性疫苗一直以來是針對HCMV的優(yōu)先級研究對象。

空白雖然疫苗研發(fā)已有40多年的研發(fā)歷程，但是目前臨床上尚無有效的HCMV疫苗。在病毒疫苗研發(fā)過程中，病毒顆粒分析是非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的分析方法，依賴于病毒蛋白或DNA染料。這種分析方法有很大的局限性，因為同一種類型的病毒，會有不同類型的病毒顆粒，如HCMV病毒顆粒，包括感染性病毒顆粒（直徑約200nm），非感染性致密小體和包膜顆粒。其中不同病毒顆粒攜帶有相同蛋白質(zhì)包膜的特點，極大地限制了通過蛋白質(zhì)特異性抗原進行病毒顆粒的區(qū)分。此外，雖然30年以前已有研究人員嘗試流式分析法分析病毒顆粒，并且在最近的研究中，美國哈佛醫(yī)學(xué)院科學(xué)家Dr. Raphael Gaudin和其同事利用流式分析法揭示了病毒表面糖蛋白濃度和病毒傳染性的關(guān)系，但是由于傳統(tǒng)流式散射光檢測靈敏度的局限性，新的分析設(shè)備和分析方法仍然亟待建立起來。

空白近日，美國默克集團研發(fā)人員Josef Vlasak等人通過在減毒的AD169毒株上恢復(fù)表達gH，并建立全新的HCMV納米流式分析方法，實時監(jiān)控病毒顆粒，及時優(yōu)化疫苗生產(chǎn)條件，最終在提高疫苗接種的免疫反應(yīng)上取得了重大突破。該疫苗的免疫優(yōu)勢為，它可以全面地呈現(xiàn)HCMV糖蛋白，并且可以引起更加強烈的CD8+免疫細胞反應(yīng)，進而保護不同類型的細胞免受感染，目前已經(jīng)處于I 期臨床實驗。其中，納米流式分析法，研發(fā)人員推薦使用了英國Apogee公司超靈敏納米流式分析儀Apoge A50 Micro。Apoge A50 Micro獨特的光路設(shè)計允許通過散射光檢測低至80nm的小顆粒物質(zhì)，同時擁有極佳的分辨率(10nm)。僅僅通過散射光，Apoge A50 Micro便可以收集病毒樣品多屬性的表征信息(圖1)(包括病毒滴度和顆粒純度等信息)。這些信息輕易地獲取方式可以替代那些消耗人力和時間的檢測方式，讓近乎實時地監(jiān)測各種病毒顆粒的分泌水平(圖2)，極大地加快推動疫苗研發(fā)稱為可能。此外，結(jié)合免疫熒光，Apoge A50 Micro還可以分析HCMV關(guān)鍵抗原(gB或gH)在不同病毒顆粒上的分布(圖3)，監(jiān)控病毒顆粒的純度。因此，Josef Vlasak等人建立的HCMV納米流式分析方法，將會給HCMV信息表征和疫苗研發(fā)帶來巨大的便利，同時也對研究其它種類的大病毒顆粒及疫苗研發(fā)具有非常重要的參考價值。