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NEPA21原位貼壁電轉(zhuǎn)人原代脂肪前體細胞成功

瀏覽次數(shù):5286 發(fā)布日期:2013-3-29  來源:本站 本站原創(chuàng),轉(zhuǎn)載請注明出處

      人脂肪前體細胞(Human Preadipocytes,HPAd)來源于人脂肪組織,呈成纖維狀,經(jīng)誘導(dǎo)可分化為成熟的脂肪細胞(Human Adipocytes,HAd)。HPAd來源的HAd常被用來研究胰島素誘導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運、生長激素增強的脂類分解以及肥胖基因的表達等。HPAd和HAd可用于體外研究肥胖的原因和治療、II型糖尿病以及心血管疾病的模型。有趣的是,源于人網(wǎng)膜脂肪組織的HPAd和HAd在脂類分解和leptin表達上與源于皮下脂肪組織的存在顯著差異。
      眾所周知,原代細胞的轉(zhuǎn)染是不容易實現(xiàn)的,HPAd同樣如此,普通的轉(zhuǎn)染試劑,如脂質(zhì)體等,基本轉(zhuǎn)不進去,即使用病毒感染,效率也很低。電轉(zhuǎn)染理論上可以作用于任何種類的細胞,但是由于技術(shù)的限制,電轉(zhuǎn)染技術(shù)一直未能在動物細胞領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。NEPA21采用全新設(shè)計的電轉(zhuǎn)程序,特別適用于難轉(zhuǎn)染細胞、離體組織或動物活體的轉(zhuǎn)染。配合獨有的電壓衰減(Voltage Decay)設(shè)計,NEPA21可在獲得高轉(zhuǎn)染效率的同時,提高細胞存活率。

      2013年3月27日,華粵行細胞生物學(xué)團隊在南京醫(yī)科大學(xué)進行的人脂肪前體細胞進行的原位貼壁電轉(zhuǎn)DEMO,盡管電轉(zhuǎn)前細胞融匯度已經(jīng)近乎100%,可是最佳轉(zhuǎn)染程序組的轉(zhuǎn)染效率仍能達到約35%,細胞存活率在95%以上。兩個課題組的老師對電轉(zhuǎn)染的效果給予了高度的評價。

 

 

     3T3-L1(Mouse embryonic fibroblast - adipose like cell line)雖為脂肪前體細胞系,但是用普通的轉(zhuǎn)染方法,同樣不容易獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。而電轉(zhuǎn)實驗結(jié)果的顯示(如下圖),NEPA21可以高效地轉(zhuǎn)染該種細胞及其分化成熟的脂肪細胞。

 
Preadipocytes, Fibroblast like before differentiation(In Suspension)

 

Adipocyte-like after differentiation(In Adherence)

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