美國(guó)ANASPEC公司在成功地開(kāi)發(fā)和上市具有專(zhuān)利保護(hù)的(硫醇)Thiol定量測(cè)定試劑盒后,應(yīng)許多客戶(hù)的要求,該公司又開(kāi)發(fā)了高靈敏度的總谷胱甘肽(GSH)檢測(cè)試劑盒。
谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)便的高度靈敏熒光檢測(cè)方法,用來(lái)測(cè)定總谷胱甘肽濃度(GSH+GSSG)。其原理是應(yīng)用了一種全新的熒光試劑,與還原型的GSH接觸和反應(yīng)后,釋放出熒光,在波長(zhǎng)490/520 nm可用熒光檢測(cè)儀測(cè)出。在谷胱甘肽還原酶作用下,氧化型谷胱甘肽會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)檫原型谷胱甘肽,因此可對(duì)總谷胱甘肽水平進(jìn)行定量測(cè)定。本試劑盒靈敏度線(xiàn)性范圍是0.2-100 mM 谷胱甘肽,在試劑盒中包括5-磺基水楊酸(Sulfosalicyclic acid)以去除生物樣品中的蛋白質(zhì)。
同時(shí)ANASPEC還開(kāi)發(fā)了檢測(cè)總谷胱甘肽水平的顯色反應(yīng)試劑盒,試劑盒中含有Eliman氏試劑 [5, 5?dithiobis (2-nitrobenzoic acid)]。Eliman氏試劑與谷胱甘肽接觸反應(yīng)后會(huì)釋放出有顏色的產(chǎn)物,用ELISA檢測(cè)儀在415 nm波長(zhǎng)處可以測(cè)出。顯色反應(yīng)的強(qiáng)度與谷胱甘肽濃度成正比。
谷胱甘肽在動(dòng)物、植物和原蟲(chóng)是主要的硫醇復(fù)合物,谷胱甘肽在細(xì)胞抵抗氧化物的損害中起著關(guān)鍵作用,是谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽過(guò)氧化酶的共同因子。在維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài),氨基酸轉(zhuǎn)移和線(xiàn)粒體呼吸中谷胱甘肽也起著作用。總谷胱甘肽包括還原型和氧化型兩種形式,谷胱甘肽氧化后就轉(zhuǎn)變?yōu)镚SSG。由于GSSG的數(shù)量增加,GSH/GSSG比例就會(huì)下降,檢測(cè)GSH和GSSG的濃度以及它們的分子濃度比例,是細(xì)胞的功能和氧化物損害水平的重要指標(biāo)。
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