由于成本或溶劑的可獲取性，有時有必要在反相MPLC中采用與原方法不同的溶劑。許多方法使用乙腈，但在純化規(guī)模放大時，可能更傾向于使用其他溶劑。為了提高純化效果，可能需要進行溶劑替換。

本應(yīng)用說明描述了一種方法，可以簡便地估算替代溶劑的濃度，以獲得與原方法所用溶劑相似的結(jié)果。

在反相色譜法中能夠更換溶劑，這使得從分析規(guī)模轉(zhuǎn)換到制備規(guī)模成為可能，或者通過替換溶劑來節(jié)省成本。當(dāng)所需溶劑不可獲得時，溶劑替換也是有用的。

圖1中的列線圖列出了反相中常用的各種有機溶劑的等效濃度。通過使用垂直線連接當(dāng)前溶劑濃度與新溶劑的濃度來讀取新溶劑的濃度。40%乙腈（MeCN）的溶劑可以替換為50%甲醇（MeOH）或30%四氫呋喃（THF），以獲得相同的純化效果。實際上，根據(jù)化合物的不同，這可能會有所±5%的變化，但使用列線圖將提供一個接近的起點。

圖1：溶劑間轉(zhuǎn)換時，確定有機溶劑組成的列線圖

等度洗脫

所有實驗都是使用吸附在硅藻土上的尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，并通過固體負(fù)載柱進行的。這些實驗與采用40%乙腈的分離效果進行了比較。等度洗脫對溶劑濃度非常敏感。圖2顯示40%乙腈的純化結(jié)果與根據(jù)圖一找到的對應(yīng)溶劑濃度純化的解果。將甲醇和四氫呋喃的濃度調(diào)整5%（圖3）可使純化效果更接近原始的乙腈運行結(jié)果。

圖2：使用基于列線圖的等度洗脫方法純化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的結(jié)果

圖3：使用調(diào)整后的等度洗脫方法純化尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的結(jié)果

由于溶劑與不同化合物類別之間的選擇性差異，很難使在不同溶劑中運行的色譜圖完荃匹配。改變沖提溶劑可以利用來調(diào)整洗脫化合物之間的間距。在這范例中，四氫呋喃（THF）與甲醇和乙腈相比顯示出顯著差異。

梯度洗脫

大多數(shù)MPLC純化都是使用梯度洗脫進行的。為了推定不同溶劑所適用的梯度，只需依上述方式于列線圖找出對應(yīng)沖提濃度后，以等梯度方法運行即可。對于圖4中的例子，梯度從5%乙腈跑到95%乙腈。使用列線圖得到了5%至95%甲醇和5%至69%四氫呋喃的梯度。

三種溶劑都表現(xiàn)出了純化效果，但選擇性略有不同。選擇性差異是因為溶劑之間的轉(zhuǎn)換是非線性的。依照本文闡述方法來調(diào)整反向沖提的有機溶劑便可快速找到更好的通提條件。

圖4：使用乙腈、甲醇和四氫呋喃對尼泊金甲酯和尼泊金丙酯進行梯度純化的色譜圖

C18方法可根據(jù)溶劑的可獲取性或成本輕松轉(zhuǎn)換為替代溶劑。此外，溶劑替換列線圖提供了一種選擇方法，協(xié)助挑選不同的溶劑選擇性。