細(xì)胞培養(yǎng)過程中,臺盼藍(lán)染色和AOPI染色分析細(xì)胞活率的正確操作方式
瀏覽次數(shù):149 發(fā)布日期:2024-12-24
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在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,了解細(xì)胞的活率對于評估細(xì)胞健康狀態(tài)、優(yōu)化培養(yǎng)條件以及進(jìn)行藥物篩選等實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。細(xì)胞活率的分析方法主要包括鏡檢法(如血球計數(shù)板)、圖像分析法、電阻抗法、流式細(xì)胞術(shù)等,它們各自具有獨(dú)特的優(yōu)勢和局限性。
最常用的方法是圖像分析法,圖像分析法可以自動拍照和數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計,適應(yīng)性強(qiáng),適用于幾乎所有類型細(xì)胞的檢測,圖像分析中區(qū)別細(xì)胞死活的方式主要為臺盼藍(lán)染色和AOPI染色。
染色原理:臺盼藍(lán)染色和AOPI染色
臺盼藍(lán)染色原理:正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍(lán),使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色,通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。因此,
被染色的細(xì)胞為死細(xì)胞,沒有被染色的為活細(xì)胞。
AOPI染色原理:AOPI試劑由AO(Acridine Orange,吖啶橙)和PI(Propidium iodide,碘化丙啶)組成。其中,AO是一種異染性熒光陽離子染料,可滲透細(xì)胞膜,并嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,檢測到綠色熒光。PI不能通過完整的細(xì)胞膜,只能進(jìn)入死細(xì)胞的細(xì)胞膜,并嵌入死細(xì)胞的細(xì)胞核,檢測到紅色熒光。當(dāng)AO、PI試劑均存在于細(xì)胞中,在合適的染料配比下,染料間會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,致活細(xì)胞被激發(fā)出綠色熒光,死細(xì)胞被激發(fā)出紅色熒光。
影響因素:結(jié)果依賴于實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范
AOPI染色和臺盼藍(lán)染色作為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中評估細(xì)胞活力和數(shù)量的關(guān)鍵方法,在傳統(tǒng)的圖像分析法中,其結(jié)果是否準(zhǔn)確高度依賴于實(shí)驗(yàn)人員是否嚴(yán)格遵守操作規(guī)范。在AOPI中,染色工作液的配制、細(xì)胞樣本的處理及檢測時的操作細(xì)節(jié),任何一環(huán)的人為疏忽都可能影響細(xì)胞染色效果和最終的分析結(jié)果。同樣,在臺盼藍(lán)染色過程中,細(xì)胞懸液的制備、染料的配制與染色時間以及細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性,均受到人為因素的影響,進(jìn)而影響細(xì)胞活力的評估。
另外,臺盼藍(lán)染料具有一定毒性,操作時需嚴(yán)格佩戴手套和口罩,做好防護(hù)措施,避免接觸皮膚和吸入氣體,對健康產(chǎn)生不利影響。
自動化解決方案:消除人為操作風(fēng)險
細(xì)胞樣品制備實(shí)現(xiàn)自動染色和混勻:浚真生命科學(xué)自主研發(fā)的微流控芯片,將臺盼藍(lán)/AOPI染料試劑包埋于微米級的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)中,細(xì)胞樣品從微流控芯片進(jìn)樣口進(jìn)入后,將在流向芯片檢測區(qū)的過程中實(shí)現(xiàn)自動染色和混勻,不再需要人為進(jìn)行樣品染色及混勻制備,消除人為操作風(fēng)險,不僅為實(shí)驗(yàn)人員減輕工作量,避免雜質(zhì)干擾,還為檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確性提供有力保障。
光學(xué)系統(tǒng):雙熒光+明場適應(yīng)各種染色方式
雙熒光+明場集成光學(xué)系統(tǒng):浚真生命科學(xué)研發(fā)的CytScop®系列智能細(xì)胞計數(shù)儀搭載“雙熒光+明場”的寬場大視野光學(xué)系統(tǒng),結(jié)合高分辨率物鏡及自動對焦計數(shù),在捕獲更多細(xì)胞樣本的同時,保持高對比度及清晰度,可實(shí)現(xiàn)自動調(diào)整焦距和曝光度,無需人為干預(yù),在明場下有良好的細(xì)胞形態(tài)細(xì)節(jié)表現(xiàn)能力,暗場中能夠收集更多熒光信號,識別細(xì)胞更準(zhǔn)確。“雙熒光+明場”集成式光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計,方便用戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自如選擇細(xì)胞染色方法,輕松獲取準(zhǔn)確的分析數(shù)據(jù)。
CytScop®的AI模型能夠更科學(xué)地識別細(xì)胞凋亡/團(tuán)簇團(tuán)聚等復(fù)雜情況;模型運(yùn)行時,不再需要人為設(shè)置各種參數(shù)閾值如直徑、亮度、圓度、系數(shù)等,對不同的細(xì)胞類型/生物工藝具有良好的可拓展性與更準(zhǔn)確的泛化能力,使得分析結(jié)果更加準(zhǔn)確。