NCAD染色的整個CO（cortical organoids）和ENO（expanded neuroepithelium organoids）類器官的代表性熒光圖像。虛線描繪了不同類器官中rosettes的基部和神經(jīng)上皮結(jié)構^[1]。

用 GFAP（紅色）、Iba-1（綠色）和 CD68（青色）以及 DAPI（藍色）抗體染色的 40 周齡雄性 Conv-R、GF 和 Ex-GF 小鼠海馬切片的代表性免疫熒光圖像^[2]。

高分辨模塊Lightning
針對更高分辨率的需求，徠卡的高分辨模塊Lightning幫助研究人員能夠更清晰地觀察到神經(jīng)元的亞細胞結(jié)構，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器，以及它們之間的空間定位關系。Lightning模塊的應用極大地擴展了我們對神經(jīng)元內(nèi)部世界的認知邊界。

納米超高分辨TauSTED Xtend
為了進一步提升分辨率，徠卡發(fā)展了納米超高分辨TauSTED Xtend技術。STED（受激發(fā)射損耗）實現(xiàn)了遠超傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡的分辨率。TauSTED Xtend模塊將這一技術推向了極致，使得分辨率達到納米級別。這一技術革新使得研究人員能夠直接觀察到分子尺度的細節(jié)，如蛋白分子的精確定位和動態(tài)變化，為揭示神經(jīng)元功能機制提供了強有力的支持。

來自DIV21皮質(zhì)神經(jīng)元的GFP轉(zhuǎn)染(灰色)樹突的代表性Raw STED和Tau-STED圖像[3]。用Alexa Fluor 594偶聯(lián)二抗(紅色)和直接與Abberior STAR 635P偶聯(lián)的PSD-95納米體(綠色)對培養(yǎng)物進行共染色。插圖(方形)顯示了PSD-95抗體和納米體(箭頭)共同標記的脊柱。Scale bars:2 µm; inset: 500 nm。

WT、Spp1KO/KO、AppNL-F和AppNL-F·Spp1KO/KO SLM中Homer1和Bassoon puncta共定位的STED圖像[4]。Scale bars:5 µm。

功能成像熒光壽命模塊FALCON
除了結(jié)構成像外，功能成像也是腦科學研究的重要方面。徠卡的功能成像熒光壽命模塊FALCON通過測量熒光分子的壽命參數(shù)，提供了關于分子環(huán)境、相互作用以及動態(tài)變化的重要信息。這一技術特別適用于研究神經(jīng)元活動時的蛋白構象變化、離子濃度波動等生理過程。FALCON模塊的應用使得研究人員能夠在細胞水平上實時觀測神經(jīng)元的功能狀態(tài)，以及研究細胞內(nèi)環(huán)境的變化，如氧化還原狀態(tài)、pH值變化等，為深入理解大腦的工作原理提供了新的視角。

造血干細胞和祖細胞(HSPCs)代謝表型的FLIM分析示意圖(左)和體外分化的造血干細胞和新分離的HSPCs沿分化層次的代表性圖像(右)^[5]。Scale bars:10 µm。

徠卡腦科學跨尺度成像解決方案，無論是精細結(jié)構的可視化還是功能狀態(tài)的實時監(jiān)測，這一方案都展現(xiàn)了強大的潛力和廣泛的應用前景。隨著技術的不斷進步和完善，徠卡顯微將繼續(xù)為揭開大腦奧秘貢獻更多的智慧和力量。

參考文獻：（上下滑動查看更多）

[1]Pagliaro, A., Finger, R., Zoutendijk, I. et al. Temporal morphogen gradient-driven neural induction shapes single expanded neuroepithelium brain organoids with enhanced cortical identity. Nat Commun 14, 7361 (2023). doi:10.1038/s41467-023-43141-1

[2] Dong-oh Seo et al. ,ApoE isoform– and microbiota-dependent progression of neurodegeneration in a mouse model of tauopathy.Science379,eadd1236(2023).DOI:10.1126/science.add1236

[3] Jones G, Akter Y, Shifflett V, Hruska M. Nanoscale analysis of functionally diverse glutamatergic synapses in the neocortex reveals input and layer-specific organization. Preprint. bioRxiv. 2024. doi:10.1101/2024.05.01.592008

[4] De Schepper, S., Ge, J.Z., Crowley, G. et al. Perivascular cells induce microglial phagocytic states and synaptic engulfment via SPP1 in mouse models of Alzheimer’s disease. Nat Neurosci. 26, 406–415 (2023). doi:10.1038/s41593-023-01257-z

[5] Hao Zhou et al. Label-free metabolic optical biomarkers track stem cell fate transition in real time. Sci. Adv.10, eadi 6770(2024). DOI:10.1126/sciadv.adi6770
 

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