免疫熒光染色技術(shù)廣泛用于樣本中待測標(biāo)志物的含量分析，待測標(biāo)志物在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的分布以及不同標(biāo)志物之間的相互作用，在細(xì)胞水平和組織水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)論證，有效銜接微觀分子水平到宏觀動物整體水平之間的研究工作。

 

在切片免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)中，掃描成像是其中關(guān)鍵一環(huán)，高清的圖像更利于后續(xù)的空間結(jié)構(gòu)分析和精準(zhǔn)的定量分析。因此，選擇合適的切片掃描設(shè)備尤為重要。現(xiàn)有主要兩大類，一類是以共聚焦顯微鏡為代表的設(shè)備，其成像效果佳，可有效去除背景熒光，但是操作復(fù)雜，使用門檻高，沒有足夠的經(jīng)驗(yàn)很難拍出高質(zhì)量的圖片。另一類設(shè)備是玻片掃描儀，相對于共聚焦顯微鏡，操作簡單易上手，然而主流的熒光切片掃描儀多是寬場成像（非共聚焦成像），圖片的背景熒光強(qiáng)、圖片質(zhì)量差，無法精準(zhǔn)定位和定量。 

 

同時，這兩類設(shè)備存在一些共性問題：易脫焦-掃描儀不能判斷最佳的聚焦位置，尤其面對平整度較差的樣本時更突出（圖1）。此外還需要后期拼接——受限于工作機(jī)制，需要將整個樣本分割成小塊區(qū)域，逐個掃描之后再拼接完成，一定程度上導(dǎo)致圖像在接縫處失真。由于CCD是采用面成像的工作原理，成像區(qū)域的中央和四周光強(qiáng)不一致，反映在圖像上為中央明亮，周圍暗淡，仍需要后期進(jìn)行陰影校正。（圖2）

圖1 （左）平整度較差的樣本，掃描完成的圖像四周出現(xiàn)明顯脫焦 （右）傳統(tǒng)掃描儀掃描后的圖片，需要后期拼接和陰影校正，影響圖片質(zhì)量

 

在此背景下，法國Innopsys公司推出了InnoQuant熒光玻片掃描儀。這款設(shè)備利用激光共聚焦成像，逐點(diǎn)成像、整片一次掃描的技術(shù)，給免疫熒光染色技術(shù)帶來了新的革命。

 

InnoQuant內(nèi)置三種對焦模式：定焦（Fixed focus）、Autofocus by surface和Autofocus by content。除了定焦模式采用固定不變的焦距之外，另外兩種模式可以根據(jù)樣本的內(nèi)部結(jié)構(gòu)或者玻片自身的平整度，識別出最佳的聚焦平面，避免脫焦。

不用于其他設(shè)備的多個分割區(qū)域掃描再拼接的方法，InnoQuant采用逐點(diǎn)掃描，一次成像的方式，將整個樣本最真實(shí)地保存下來，無需任何后續(xù)拼接和加工。此外，逐點(diǎn)掃描保證采集樣本信息時所有的激發(fā)光都保持同一水平，不存在因光強(qiáng)不一致導(dǎo)致的結(jié)果失真，無需陰影校正，保證后續(xù)分析結(jié)果準(zhǔn)確。(圖2)

圖2  （A）傳統(tǒng)掃片原理（左）與InnoQuant掃片原理（右） （B）百合花切片掃描結(jié)果比較：傳統(tǒng)掃片裝置（左）與InnoQuant掃描結(jié)果（右）

InnoQuant內(nèi)置4組獨(dú)立激光光源和PMT檢測器，每個PMT最多可安裝7個濾光片，不但兼容常用熒光染料，還可根據(jù)用戶需求定制。此外，4個檢測通道可同時工作，一張4熒光染料標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)玻片（26mm*76mm），在17min內(nèi)完成掃描，而共聚焦顯微鏡則需要數(shù)個小時，InnoQuant掃描速度更快。

 

 

作為一款最新推出產(chǎn)品，InnoQuant憑借其獨(dú)特的工作原理，強(qiáng)有力的硬件配置，已成為滿足廣大科研工作者免疫熒光染色的強(qiáng)有力的助手。

 

Innopsys 成立于1999年。總部位于法國，一直致力于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域相關(guān)儀器和軟件的自主研發(fā)和生產(chǎn)。InnoQuant組織切片/生物芯片掃描儀，采用先進(jìn)的共聚焦PMT檢測器和多激光掃描光路，可以同時進(jìn)行多通道熒光檢測。不僅掃描結(jié)果清晰，而且無需后續(xù)拼接和陰影校正處理，在組織切片和生物芯片掃描領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。

 

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