單域抗體，也稱為VHH（Variable domain of heavy chain of HCAb）抗體或納米抗體，是一種小型抗體分子。與傳統(tǒng)抗體相比，VHH具有更小的分子尺寸、更高的穩(wěn)定性和更易于工程化的特點(diǎn)，具有廣泛的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用潛力。單域抗體文庫的構(gòu)建是開發(fā)和優(yōu)化這些抗體的關(guān)鍵步驟之一。
 
一、單域抗體的特點(diǎn)
 
- 小分子尺寸：VHH通常只有約15 kDa。
- 高穩(wěn)定性：能夠抵抗極端的溫度和pH值變化。
- 易于工程化：可以通過基因工程方法對其進(jìn)行改造，以提高親和力或增加新的功能。
- 良好的組織滲透性：由于小尺寸，它們能更容易地滲透到組織和細(xì)胞中。

二、單域抗體文庫構(gòu)建流程：
1. 動物免疫：選擇適當(dāng)?shù)鸟橊効苿游镞M(jìn)行免疫，通常以人類疾病相關(guān)的蛋白或病原體作為抗原。
2. 采集樣本：在一定時(shí)間后，從免疫動物的外周血液或脾臟中分離出抗原特異性的B細(xì)胞。這些細(xì)胞通常具有產(chǎn)生單域抗體的潛力。
3. RNA提取和cDNA合成：從細(xì)胞中提取總RNA，并通過逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，然后構(gòu)建一個cDNA文庫，其中包含了從特異性B細(xì)胞中提取的單域抗體基因的DNA。
4. VHH基因擴(kuò)增：使用特異性引物擴(kuò)增VHH基因。
5. 構(gòu)建文庫：將擴(kuò)增的VHH基因片段克隆到噬菌體展示載體中，構(gòu)建噬菌體展示文庫。
6. 篩選和優(yōu)化：
- 生物分子分選（Biopanning）：通過與特定靶標(biāo)蛋白的結(jié)合篩選，從文庫中鑒定具有高親和力的VHH。
- 序列分析：對篩選出的VHH克隆進(jìn)行序列分析。
- 優(yōu)化：對有潛力的VHH進(jìn)行工程化改造，以提高其性能。
 
三、單域抗體文庫的應(yīng)用
 
- 藥物研發(fā)：用于靶向藥物開發(fā)和藥物篩選，尤其是針對難以靶向的抗原。
- 疫苗研究：作為疫苗開發(fā)中的抗原識別工具，幫助鑒定疫苗候選物。
- 生物傳感：用于開發(fā)高靈敏度的生物傳感器，檢測特定分子或生物標(biāo)志物。
- 腫瘤治療：用于免疫療法和靶向治療，提高治療效果并減少副作用。
- 診斷工具：由于其高特異性和穩(wěn)定性，VHH可用于開發(fā)診斷試劑和生物標(biāo)記物檢測。
 
      單域抗體（VHH）是一種由單個抗體變量域組成的小分子抗體，源自駱駝科動物（例如駱駝、羊駝和維庫尼亞駱駝）的重鏈抗體。這些單域抗體具有高親和力、高穩(wěn)定性、易于生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，使它們在生物醫(yī)藥和診斷領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用潛力。單域抗體文庫的構(gòu)建是解鎖多樣性抗體的重要一步，為研究人員和制藥公司提供了強(qiáng)大的工具，用于解決復(fù)雜的生物學(xué)問題和推動生物醫(yī)學(xué)研究的進(jìn)展。這些高效、特異性和多功能的抗體有望在未來的醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。